来源：支原体检测假阴性样品富集（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
细胞培养最怕支原体污染，更怕检测假阴性。明明细胞状态下滑，PCR却白板。问题多半出在样品富集环节。本文从取样、富集到DNA提取，拆解假阴性的常见坑，给你能直接上手的排查步骤。
第一步：快速排查低级错误
- 取样量太少：只取1 mL上清，支原体滴度低到测不出。直接取10 mL培养上清，2000×g离心10 min去细胞，再超速离心富集。
- 没设阳性对照：PCR无扩增你根本不知道是试剂问题还是样品问题。每批加支原体DNA标准品（如10^4拷贝）做阳性对照。
- 样品反复冻融：DNA断裂，Ct值偏大。新鲜取样，或-80°C分装保存，避免超过2次冻融。
- 离心力不够：支原体直径0.2-0.3 μm，普通离心沉不下来。必须用100,000×g超速