来源：核酸提取A260/280偏低蛋白残留（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
你刚测完Nanodrop，A260/280只有1.5，甚至1.4。产量还行，心里却咯噔一下。别急着丢样本。这个比值偏低，大概率是蛋白、酚或胍盐残留。本文按“快速低级错误→分流程系统排查→进阶疑难”三步走，覆盖酚氯仿法、硅胶柱法、磁珠法。每步给判断、验证、解决。跟着做，多数样本还能救回来。
第一步：快速排查低级错误
1. 空白没扣对？用与样本相同的洗脱液做blank，别用ddH2O，pH差异会拉低A280。
2. 样本太浓？A260超过1.5就稀释10倍，高浓度核酸偏离线性，比值会飘。
3. 比色基座有残留？2 µL样本前用无尘纸擦干，气泡和乙醇让A280虚高。
4. 测前没混匀？移液器吹打5次，37°C孵育2分钟，让核酸完全溶解。
第二步：分维度系统排查
2.1 裂解不彻底，蛋白没释放
现象：裂解液粘稠，有胶状团块，移液器吸头拉丝。
原理：细胞核未破，蛋白与DNA交联，后续抽提去不掉。
解决：补10 µL 20 mg/mL蛋白酶K，加SDS至终浓度1%，55°C孵育1-2 h。每20 min轻弹混匀。CTAB法可补5 µL β-巯基乙醇。
验证：裂解液应清亮，无拉丝。取5 µL跑琼脂糖凝胶，点样孔无滞留。
2.2 酚氯仿抽提不足
现象：中间层厚，水相浑浊，A260/280掉到1.4-1.6。
原理：蛋白未完全变性，留在水相里。
解决：加等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，涡旋10 s，12000×g 4