来源：毛细管电泳进样量少压力（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
跑CE最怕什么？图谱峰面积突然掉一半，或者干脆没峰。方法没改，样品没换，压力明明设了0.5 psi，进样5秒——可进样量就是少。这事八成跟压力系统、缓冲液粘度或者毛细管状态有关。本文按实验流程拆成三步：先扫低级错误，再分模块深挖压力、粘度、堵塞、密封四个方向，最后聊几个容易翻车的进阶坑。每一步都给你判断方法、验证动作和解决参数。
第一步：快速排查低级错误
先别拆机器。新手出问题，十次有三次是设置或摆放的锅。
1. 进样时间单位搞混。方法里写0.5 min还是5 s，差了60倍。有些软件默认毫秒，有人手动敲了“5”，结果进样5 ms，峰小到看不见。直接看方法参数栏，确认单位是秒还是毫秒，流体动力学进样常用5-10 s。
2. 样品瓶放错位或液位太低。自动进样器盘位上错一格，插到空瓶里吸了半天空气。液位低于毛细管入口，压力再大也吸不上东西。进样前目视检查，液面至少高于瓶底5 mm，盘位表对一遍。
3. 进样端压力实际没到位。方法设了0.5 psi，但气路没接通或减压阀卡了。你以为在进样，实际在干吸。看仪器面板实时压力读数，进样瞬间压力表指针要动。
4. 毛细管总长和有效长度设错。软件里填的总长比实际短10 cm，进样体积换算全错。用尺子量进样端到检测窗口的距离，重新输入。
第二步：分维度系统排查
低级错误扫完还有问题，按流程往下走。从进样前、进样中、进样后三段切。
模块一：进样前——样品与缓冲液
1. 缓冲液粘度过高
现象：峰面积整体偏低，迁移时间还拖长。原理：流体动力学进样体积V=ΔP·d⁴·π·t/(128·η·L)。粘度η上去，V就掉。高盐缓冲液、加了很多有机溶剂的体系，粘度能翻倍。
怎么判断：量一下缓冲液电导率，或者换瓶新鲜配的试试。验证：用标准品进样，看峰面积是否恢复。解决：缓冲液离子强度控制在20-50 mM，有机溶剂比例别超20%，温度稳定在25°C。
2. 样品溶剂与缓冲液不匹配
现象：峰形前伸、面积忽大忽小。原理：溶剂电导率远低于缓冲液时，样品堆叠会导致局部浓度过高，进样表观体积异常。反过来，高盐样品会扩散。
怎么判断：对比样品溶于水vs溶于缓冲液的图谱。验证：同一浓度稀释成两个溶剂进样。解决：样品尽量用缓冲液或稀缓冲液（1:10）溶解。
3. 样品瓶液位不足
现象：连续进样后几针峰越来越小。原理：每针吸走一点，液面降到毛细管口以下就吸空了。解决：每针至少准备50 µL样品，96孔板每孔100 µL起步。
模块二：进样中——压力系统
4. 气路泄漏或减压阀故障
现象：设定0.5 psi，实际进样量只有预期一半，且重复性差。原理：压力传递不到位，实际ΔP打了折。
怎么判断：在毛细管出口接一段水柱，看进样时气泡冒出的速度。验证：用同一瓶标准品连续进样6针，RSD>5%就要查气路。解决：检查管路接头，换减压阀密封圈，进样压力重新校准。
5. 进样端密封圈老化
现象：压力上不去，仪器报错或压力波动。原理：密封圈用久了硬化，毛细管和接口之间漏气。解决：每3个月换一次密封圈，或进样500次后更换。
6. 毛细管部分堵塞
现象：峰面积骤降，压力读数偏高。原理：堵塞处内径有效值变小，d⁴项直接掉一个量级。判断：取下毛细管，用注射器推水，看流速。验证：换一根新毛细管对比。解决：0.1 M NaOH冲洗10分钟，再用超纯水冲5分钟；不行就截掉进样端2 cm重新烧窗。
模块三：进样后——毛细管与检测
7. 毛细管切割端面毛糙
现象：进样重复性差，峰面积RSD超过8%。原理：端面不平整，进样时样品塞形状不规则。解决：用陶瓷切割刀垂直切，切完在显微镜下看，端面要平整无缺口。
8. 毛细管内气泡
现象：电流不稳，峰面积忽高忽低。原理：气泡占据内径，阻断压力传递。判断：看电流基线是否跳动。解决：排气泡，缓冲液超声脱气10分钟，进样前冲洗毛细管。
9. 检测窗口位置偏移
现象：峰面积突然整体变小。原理：窗口不在最佳检测位置，有效长度变了。解决：重新烧窗，位置距进样端为总长的2/3处。
第三步：进阶疑难问题
1. 毛细管内壁涂层脱落
现象：电渗流不稳定，进样量波动大。原理：涂层脱落导致EOF改变，压力进样和电渗流耦合失效。判断：测EOF标记物迁移时间，看是否漂移。解决：换新毛细管，或重新涂层。
2. 进样端温度梯度
现象：夏天进样量比冬天低10-15%。原理：温度升高粘度降低，按理V应该增大；但温度高时缓冲液蒸发，液位变化。解决：毛细管卡盘恒温25°C，样品室加湿。
3. 电进样与压力进样混淆
现象：方法里选的是电进样，但你按压力进样体积去算。