来源：细胞培养基沉淀析出pH渗透压（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
细胞养得好好的，换瓶新培养基，第二天全飘了。瓶底一层白雾，上清发紫，细胞皱成葡萄干。你以为是污染，LB平板却没长菌。大概率是沉淀——pH和渗透压这两个隐形推手在作怪。这篇把培养基沉淀拆成三段：先扫低级错误，再按配制、灭菌、储存、使用四条线系统排查，最后聊几个过滤都滤不掉的进阶坑。每一步都给判断依据、具体参数和验证动作，照着做，别一有沉淀就整瓶倒掉。
第一步：快速排查低级错误
- 瓶底白雾、上清清亮？先别倒。4°C静置2小时，沉淀沉降说明是盐析，不是污染。转37°C水浴15分钟，多数磷酸钙会复溶。
- 你用的水对吗？电阻率低于18.2 MΩ·cm的水里Ca²⁺、Mg²⁺能到0.5 ppm，配1 L培养基就够生成肉眼可见沉淀。换Milli-Q水重配。
- NaHCO₃称多了吗？2.2 g/L配5% CO₂，3.7 g/L配10% CO₂。多称0.5 g，pH能冲到8.0以上，瓶底直接结沙。
- 瓶盖拧死了？T25瓶拧到不透气，CO₂进不来，pH升到7.8，培养基发紫。留半圈松，或换透气盖。
第二步：分维度系统排查
1. 配制顺序错了：钙和磷酸盐同瓶浓缩。
现象：调完pH瞬间泛白，越搅越浑。
原理：Ca²⁺和HPO₄²⁻的溶度积只有2.0×10⁻²⁹（25°C），局部浓度一高就成核。
解决：配10×母液时把CaCl₂和Na₂HPO₄分开，A液装无机盐，B液装Ca/Mg，用前各自稀释到1×再混合。
验证：混完用0.22 µm滤膜过滤，滤膜上白点多就是沉淀，不是污染。
2. NaHCO₃与CO₂不匹配。
现象：培养箱放一夜，pH 7.8-8.1，酚红发紫，瓶底细沙。
原理：NaHCO₃/CO₂是缓冲对，2.2 g/L在5% CO₂下平衡到pH 7.2-7.4。CO₂不够，HCO₃⁻水解，pH升，CaCO₃跟着沉。
解决：先测培养箱CO₂，用Fyrite或CO₂计，稳定在5%±0.2%。再按对应浓度称NaHCO₃。
验证：培养基开盖放培养箱4小时，拿出来立刻测pH，和刚配的比，差值大于0.3就是缓冲对没配平。
3. pH调节加碱太猛。
现象：1 M NaOH一滴一滴加，局部pH>10，乳白不散。
原理：局部过碱让Ca²⁺直接变成Ca(OH)₂，再转CaCO₃，沉淀不可逆。
解决：把1 M NaOH稀释到0.1 M再调，边加边摇，每加10 µL测一次。目标pH 7.2-7.4，别追7.4上限。
验证：调完静置30分钟复测，回弹大于0.1说明还有沉淀在溶解平衡。