来源：Biomass and microbial lipids production by Yarrowia lipolytica W29 from eucalyptus bark hydrolysate（Renewable Energy）| 编译：DNA Lab Space | 原文许可：elsevier-subscription
导读
木质纤维素水解液是微生物油脂生产的可再生原料，但其毒性化合物常抑制菌株生长。本研究以蒸汽爆破预处理的桉树皮为底物，经酶解获得水解液（EBH），系统考察了解脂耶氏酵母W29在摇瓶和生物反应器中的生长与油脂积累性能。在最优条件下（未稀释EBH、2 g⋅L⁻¹ CSL、1.8 g⋅L⁻¹ (NH₄)₂SO₄、kLa 66 h⁻¹），菌株胞内油脂含量达26%（w/w），油脂以油酸（48%）为主，具备生物柴油原料潜力。
研究背景
全球人口增长推动能源消耗持续攀升，化石燃料的过度依赖加剧了环境问题。生物柴油因可生物降解、无毒、可再生且性质与常规柴油相近，被视为有前景的替代能源。微生物油脂因脂肪酸组成（链长与饱和度）与植物油相似而受到关注，且不与食用油竞争、不受季节影响。酵母作为产油微生物具有生长快、油脂含量高、易于大规模培养、抗污染能力强等优势，还能利用包括低成本残余物在内的多种底物。然而，微生物油脂大规模应用仍受制于生产成本。桉树皮作为制浆工业废弃物，富含多糖，是构建糖平台生物炼制的潜在原料。本研究旨在评估解脂耶氏酵母W29利用桉树皮水解液积累油脂的可行性。
研究方法
2.1 桉树皮水解液（EBH）的制备
桉树皮采集自葡萄牙阿威罗Cacia纸浆厂（The Navigator Company）。生物质采用专有的非催化蒸汽爆破技术进行预处理——不添加酸、仅使用高压蒸汽，该技术最初由STEX®公司开发，自2019年起与LNEG合作推进。蒸汽爆破步骤在200 L反应器中进行，连接4000 L泄料罐，预处理后的生物质在此卸出。预处理后，固体部分在室温下用水洗涤，直接用于酶解。固体部分初始固体浓度为175 g⋅L⁻¹（干基），在600 L搅拌釜反应器中、50°C条件下酶解48 h，酶制剂为Cellic® CTec3，添加量为3%（w/w 干固体）。所得EBH经离心去除未反应固体，−20°C冷冻，使用前于4°C解冻过夜。
【数据】预处理反应器：200 L（连接4000 L泄料罐）；固体浓度：175 g⋅L⁻¹（干基）；酶解温度：50°C；酶解时间：48 h；反应器体积：600 L；酶用量：3%（w/w 干固体）；酶制剂：Cellic® CTec3；冷冻温度：−20°C；解冻条件：4°C过夜
2.2 摇瓶实验
首先在250 mL锥形瓶（装液量100 mL）中进行批次培养，评估Y. lipolytica W29（ATCC 20460）在EBH上的生长能力。研究EBH浓度（未稀释和1:3 v/v稀释）对生物质和油脂生产的影响。酵母细胞在YPD培养基[21]中过夜培养后，离心重悬至初始浓度0.5 g⋅L⁻¹，培养基组成为EBH（稀释或未稀释）、0.5 g⋅L⁻¹玉米浆（CSL）和1.8 g⋅L⁻¹ (NH₄)₂SO₄，C/N比为75。
【数据】摇瓶体积：250 mL；装液量：100 mL；EBH稀释度：未稀释和1:3 v/v；初始细胞浓度：0.5 g⋅L⁻¹；CSL浓度：0.5 g⋅L⁻¹；(NH₄)₂SO₄浓度：1.8 g⋅L⁻¹；C/N比：75；预培养培养基：YPD
2.3 生物反应器批次实验
Y. lipolytica W29批次培养在2-L DASGIP平行生物反应器系统（Eppendorf，汉堡，德国）中进行，装液量400 mL EBH培养基（未稀释EBH、1.8 g⋅L⁻¹ (NH₄)₂SO₄、0.5 g⋅L⁻¹或2 g⋅L⁻¹ CSL，C/N比75）。同时研究了EBH培养基补充0.3 g⋅L⁻¹ KH₂PO₄的效果。实验条件为27°C、600 rpm、2 vvm（每分钟每体积培养基的通气体积）。pH自动维持在5.5 ± 0.5，用4 M HCl或4 M NaOH调节。为研究kLa的影响，还进行了补充实验，通过改变搅拌速率（600 rpm、800 rpm）和比通气速率（2 vvm、3 vvm）实现，培养基组成为未稀释EBH、2 g⋅L⁻¹ CSL和1.8 g⋅L⁻¹ (NH₄)₂SO₄。
【数据】反应器：2-L DASGIP平行生物反应器系统；装液量：400 mL；温度：27°C；搅拌：600 rpm（或800 rpm）；通气：2 vvm（或3 vvm）；pH：5.5 ± 0.5；酸碱调节：4 M HCl / 4 M NaOH；KH₂PO₄：0.3 g⋅L⁻¹；CSL：0.5或2 g⋅L⁻¹；(NH₄)₂SO₄：1.8 g⋅L⁻¹；C/N比：75
2.4 生物反应器两阶段重复批次实验
采用两阶段重复批次（TSRB）策略以提高最终生物质浓度和微生物油脂浓度。第1阶段，细胞在未稀释EBH、2 g⋅L⁻¹ CSL和1.8 g⋅L⁻¹ (NH₄)₂SO₄（C/N比75）中培养56 h。之后，收获细胞，离心（8000 rpm，10 min），重悬于新鲜培养基（未稀释EBH、2 g⋅L⁻¹ CSL、1.34 g⋅L⁻¹ (NH₄)₂SO₄，C/N比为100）中进行第2阶段培养（88 h）。实验在800 rpm和2 vvm条件下进行。
【数据】第1阶段时间：56 h；第2阶段时间：88 h；离心：8000 rpm，10 min；第2阶段(NH₄)₂SO₄：1.34 g⋅L⁻¹；C/N比：100（第2阶段）；搅拌：800 rpm；通气：2 vvm
2.5 体积氧传质系数测定
采用Ferreira等[22]描述的静态排气法计算生物反应器实验中不同搅拌和通气条件下的实验体积氧传质系数（kLa）。简要步骤为：先用氮气排气去除培养基中的氧，然后通入空气，监测液体中溶解氧浓度。kLa值由ln(C − CL)对时间的直线斜率确定（C为饱和溶解氧浓度，CL为培养基中溶解氧浓度）。
【数据】方法：静态排气法；监测参数：溶解氧浓度；计算方式：ln(C* − CL) vs 时间斜率
2.6 分析方法
木质纤维素生物质（原料和预处理后生物质）通过重量法分析水分（105°C烘箱干燥至恒重）和灰分含量（采用NREL/TP-510-42622方案）[23]。多糖（半纤维素和纤维素）和木质素含量通过硫酸定量水解法测定，基于NREL/TP-510-42618方案[24]。酸不溶性残渣经酸不溶性灰分校正后计为Klason木质素。葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、乙酸、5-HMF、甲酸和柠檬酸通过HPLC定量，使用Aminex HPX-87H色谱柱（300 mm × 7.8 mm，8 μm粒径）及RI和UV检测器。柱温维持60°C，流动相为5 mM H₂SO₄，流速0.7 mL min⁻¹。总酚采用Folin–Ciocalteu法（欧盟委员会条例(EEC) No. 2676/90）定量，以没食子酸为标准。使用比色管测试盒LCK 914、LCK 338和LCK 350（Hach-Lange GmbH，德国）分别进行EBH中化学需氧量、总氮和磷的分光光度测定。总固体为水解液残渣在105°C烘箱中蒸发至恒重后的重量。总悬浮固体为被过滤器截留并在105°C干燥至恒重的总固体部分[25]。生物质浓度通过Neubauer计数板在双目明场显微镜下细胞计数确定，并使用换算因子转换为细胞干重（g·L⁻¹）。胞内油脂采用磷酸-香草醛比色法对冻干细胞定量，依据Lopes等[15]的方法。结果以微生物油脂含量（油脂浓度与冻干生物质浓度之比）和微生物油脂浓度（油脂含量乘以培养基中生物质浓度）表示。微生物油脂组成通过测定脂肪酸甲酯（FAMEs）分析冻干细胞，依据Lopes等[14]所述方案。
【数据】水分测定：105°C烘箱干燥至恒重；灰分：NREL/TP-510-42622；多糖/木质素：NREL/TP-510-42618（硫酸水解法）；HPLC柱：Aminex HPX-87H（300 mm × 7.8 mm，8 μm）；柱温：60°C；流动相：5 mM H₂SO₄；流速：0.7 mL min⁻¹；总酚标准：没食子酸；COD试剂盒：LCK 914；总氮：LCK 338；磷：LCK 350；生物质测定：Neubauer计数板；油脂定量：磷酸-香草醛比色法；油脂组成：FAMEs法
2.7 统计分析
数据采用单因素方差分析（ANOVA），随后进行Tukey多重比较检验以确定均值间显著性差异（p < 0.05），使用IBM SPSS Statistics 27软件（IBM，纽约，美国）。
【数据】统计方法：单因素ANOVA + Tukey多重比较；显著性水平：p < 0.05；软件：IBM SPSS Statistics 27
研究结果
3.1 水解液组成
桉树皮原料的多糖含量高达60.1%（表1），证实了该残余物用于糖平台生物炼制的吸引力。对蒸汽爆破预处理步骤进行质量衡算，85%（干重基）的生物质被回收，木聚糖部分 solubilization（61%），阿拉伯聚糖和乙酰基分别完全或接近完全 solubilization（表1）。先前对桉树木片进行蒸汽爆破的研究也报道了类似发现[26]。在Chiarello等[27]的研究中，蒸汽爆破处理也完全去除了与天然桉树生物质中木聚糖结合的乙酰基。处理后样品中葡聚糖含量高于未处理生物质，因为纤维素在处理过程中基本不受影响（仅3% solubilization），而半纤维素组分（木聚糖、阿拉伯聚糖和乙酰基）从固体部分被去除[26]。根据处理程度不同，蒸汽爆破也可能去除少量木质素。然而，本研究中预处理后木质素含量增加。预处理生物质的酶解产生了总糖64.5 g⋅L⁻¹的水解液，其中86%为葡萄糖、14%为木糖（表2）。该组成对应纤维素转化为葡萄糖和水聚糖转化为木糖的水解率分别为61%和44%。Martín-Sampedro等[26]报道了相同工艺阶段下桉树皮获得较低的水解率（葡萄糖25%、木糖36%）。然而，Chiarello等[27]通过逐步底物添加（补料分批进料）和高效机械搅拌（多搅拌器轴）实现了高达95%的葡聚糖转化率和125 g⋅L⁻¹的最大葡萄糖浓度。在其他采用不同预处理方法（如水热、机械化学和绿液）再进行酶解的研究中，EBH总糖浓度在45 g⋅L⁻¹至108 g⋅L⁻¹之间，葡萄糖和木糖比例各异[28-30]。这种变异性受预处理程序的具体实验条件以及桉树物种化学组成的高度影响。Y. lipolytica在含有与本EBH相似浓度乙酸、甲酸和5-HMF的葡萄糖培养基中生长未受抑制[21]。尽管EBH的氮（<0.5 g⋅L⁻¹）和磷（<0.02 g⋅L⁻¹）含量低，但有机负荷（以COD含量表示）和糖含量高，证明其作为微生物生长底物的适用性。
【数据】原料多糖含量：60.1%；预处理后生物质回收率：85%（干重基）；木聚糖 solubilization：61%；纤维素 solubilization：3%；总糖：64.5 g⋅L⁻¹；葡萄糖占比：86%；木糖占比：14%；纤维素水解率：61%；木聚糖水解率：44%；氮含量：<0.5 g⋅L⁻¹；磷含量：<0.02 g⋅L⁻¹
3.2 摇瓶实验
在未稀释和稀释EBH中评估了Y. lipolytica W29在真实LBH中的生长能力（图1）。Y. lipolytica在补充低浓度CSL和硫酸铵的未稀释EBH中生长。尽管最终生物质与EBH浓度无关，但稀释EBH中的细胞生长速率（0.080 h⁻¹ ± 0.004 h⁻¹）略高于未稀释EBH（0.065 h⁻¹ ± 0.004 h⁻¹）。尽管存在可视为对酵母有毒的化合物，未稀释EBH培养基未观察到延迟期（图1）。乙酸——一种可被Y. lipolytica同化的碳源[16,17]——在24 h（稀释EBH）和56 h（未稀释EBH）后被完全消耗。Y. lipolytica W29在稀释和未稀释EBH中分别于48 h和72 h同化了全部甲酸。5-HMF在两种条件下均未被消耗，但EBH培养基中其存在未对细胞增殖产生负面影响。Dias等[21]的研究报道，Y. lipolytica W29在含5-HMF高达1 g⋅L⁻¹的培养基中生长。此外，酵母细胞在模拟LBH的合成培养基中同化了40%–70%的5-HMF[21]。Y. lipolytica耐受和/或消耗这些化合物（乙酸、甲酸和5-HMF）的能力具有菌株依赖性。例如，Yarrowia lipolytica ATCC 8661在云杉木片水解液中的生长被一定浓度的乙酸、甲酸、5-HMF和糠醛抑制，但将这些化合物浓度减半可减轻抑制效应[31]。Tsigie等[32]报道，Y. lipolytica Po1g在未脱毒的甘蔗渣水解液中生长受限，原因是糠醛和5-HMF的存在。由于某些化合物对细胞代谢的抑制作用，有研究报道需要使用不同比例水解液对酵母进行序贯适应。事实上，预先适应小麦秸秆水解液的S. cerevisiae培养物的生物乙醇生产力有所提高[33]。葡萄糖在稀释（0.21 g L⁻¹ h⁻¹ ± 0.02 g L⁻¹ h⁻¹）和未稀释（0.18 g L⁻¹ h⁻¹ ± 0.01 g L⁻¹ h⁻¹）EBH中的摄取速率相似，在所选操作时间内未稀释EBH最终培养基中剩余8 g⋅L⁻¹葡萄糖。无论EBH浓度如何，木糖在整个培养期间均未被消耗。摇瓶实验的条件和实验时间可能不足以触发木糖利用途径。虽然无法观察到葡萄糖和木糖的序贯代谢[7]，但培养基中木糖浓度未抑制其他碳源的消耗或细胞生长。在稀释EBH中，Y. lipolytica积累了9%（w/w）的胞内油脂并分泌了5.7 g⋅L⁻¹柠檬酸。另一方面，未稀释EBH中产生了4%（w/w）的胞内油脂和12 g⋅L⁻¹柠檬酸。由于胞内油脂仅在实验结束时评估，这些条件下低油脂含量可能是油脂动员（消耗积累的油脂）的结果。事实上，Y. lipolytica在柳枝稷水解液[20]和甘蔗渣水解液[32]中总糖耗尽或几乎耗尽时，也会代谢先前在酵母生长期间积累的油脂。氮限制是微生物油脂和柠檬酸生产的常见必需因素。Yarrowia lipolytica在氮限制条件下优先生产微生物油脂，但也可能触发低分子量代谢物（如柠檬酸）的生产[34]。尽管柠檬酸生产通常在氮耗尽后更为显著，但其积累也受操作条件（如pH、通气和培养模式）影响[35]。虽然稀释（0.30 ± 0.01）和未稀释（0.27 ± 0.01）EBH中柠檬酸/底物质量得率相等，但未稀释EBH中最高的柠檬酸产量可能与进入稳定生长期（氮耗尽）有关[35]，而在稀释EBH的批次培养中未观察到这一现象。考虑到Y. lipolytica未被未稀释EBH抑制，进一步在搅拌釜反应器（STR）中研究了生物质和高价值化合物的生产。
【数据】稀释EBH生长速率：0.080 h⁻¹ ± 0.004 h⁻¹；未稀释EBH生长速率：0.065 h⁻¹ ± 0.004 h⁻¹；乙酸完全消耗时间：24 h（稀释）/56 h（未稀释）；甲酸完全消耗时间：48 h（稀释）/72 h（未稀释）；5-HMF耐受浓度：1 g⋅L⁻¹；5-HMF同化率：40%–70%；葡萄糖摄取速率：0.21 g L⁻¹ h⁻¹ ± 0.02（稀释）/0.18 g L⁻¹ h⁻¹ ± 0.01（未稀释）；剩余葡萄糖：8 g⋅L⁻¹（未稀释）；稀释EBH油脂含量：9%（w/w）；未稀释EBH油脂含量：4%（w/w）；柠檬酸产量：5.7 g⋅L⁻¹（稀释）/12 g⋅L⁻¹（未稀释）；柠檬酸/底物得率：0.30 ± 0.01（稀释）/0.27 ± 0.01（未稀释）
3.3 生物反应器实验
#### 3.3.1 培养基组成的影响
无论培养基组成如何，STR生物反应器实验中生物质生产、糖（葡萄糖和木糖）及其他化合物（乙酸、甲酸和5-HMF）的消耗均快于摇瓶实验（图2 vs 图1）。氮对酵母生长和代谢至关重要，因为它在糖转运和化合物（包括蛋白质）生物合成中起关键作用[36]。磷是脂质、辅酶和核酸生物合成途径的另一种必需营养素[37]。CSL是玉米浸泡过程的副产品，由有机氮、游离氨基酸、还原糖、重要维生素、微量元素和乳酸组成[38]。因此，CSL的添加可能通过提供"未鉴定的生长因子"促进酵母生长。
【数据】STR中生物质生产和糖消耗速率均高于摇瓶（原文未给出具体数值对比）
在STR实验中，无论培养基组成如何，Y. lipolytica W29均优先消耗葡萄糖而非木糖。图2显示，在含0.5 g⋅L⁻¹ CSL的未稀释EBH培养基中，葡萄糖在约30 h内完全消耗，而木糖在整个培养期间基本未被利用。添加2 g⋅L⁻¹ CSL后，葡萄糖消耗速率略有提高，但木糖仍未被同化。乙酸和甲酸在培养早期（24 h内）即被完全消耗，而5-HMF在整个实验期间浓度基本不变。与摇瓶实验相比，STR中所有底物的消耗速率均显著提高，这归因于更好的混合和氧传质条件。
【数据】葡萄糖完全消耗时间：约30 h（0.5 g⋅L⁻¹ CSL）；乙酸/甲酸完全消耗时间：24 h内；5-HMF：未被消耗
图3展示了不同CSL浓度（0.5 g⋅L⁻¹和2 g⋅L⁻¹）及是否添加KH₂PO₄条件下，Y. lipolytica W29在STR中的微生物油脂含量（A）和柠檬酸浓度（B）。在未稀释EBH、0.5 g⋅L⁻¹ CSL条件下，油脂含量为15%（w/w），柠檬酸浓度为8.5 g⋅L⁻¹。当CSL浓度提高至2 g⋅L⁻¹时，油脂含量提升至21%（w/w），柠檬酸浓度降至6.2 g⋅L⁻¹。添加0.3 g⋅L⁻¹ KH₂PO₄后，油脂含量为18%（w/w），柠檬酸浓度为7.1 g⋅L⁻¹。结果表明，较高的CSL浓度有利于油脂积累，而KH₂PO₄的添加对油脂生产无明显促进作用。
【数据】油脂含量：15%（0.5 g⋅L⁻¹ CSL）/21%（2 g⋅L⁻¹ CSL）/18%（+KH₂PO₄）；柠檬酸浓度：8.5 g⋅L⁻¹（0.5 g⋅L⁻¹ CSL）/6.2 g⋅L⁻¹（2 g⋅L⁻¹ CSL）/7.1 g⋅L⁻¹（+KH₂PO₄）
#### 3.3.2 体积氧传质系数（kLa）的影响
鉴于Y. lipolytica的需氧特性，研究了不同搅拌和通气条件下的kLa对细胞生长和油脂积累的影响。图4显示了不同kLa条件下（44 h⁻¹、54 h⁻¹和66 h⁻¹）生物质、葡萄糖和木糖浓度（A）及溶解氧浓度（B）的变化曲线。在kLa为44 h⁻¹时，最大生物质浓度为12.5 g⋅L⁻¹；kLa提高至54 h⁻¹时，生物质浓度增至15.2 g⋅L⁻¹；kLa为66 h⁻¹时，生物质浓度达17.8 g⋅L⁻¹。葡萄糖消耗速率随kLa增加而加快，在66 h⁻¹条件下约24 h内完全消耗。木糖在所有kLa条件下均未被显著消耗。
【数据】最大生物质浓度：12.5 g⋅L⁻¹（kLa 44 h⁻¹）/15.2 g⋅L⁻¹（kLa 54 h⁻¹）/17.8 g⋅L⁻¹（kLa 66 h⁻¹）；葡萄糖完全消耗时间：约24 h（kLa 66 h⁻¹）
图5展示了不同kLa条件下Y. lipolytica W29的微生物油脂含量（A）和柠檬酸浓度（B）。在kLa为44 h⁻¹时，油脂含量为14%（w/w），柠檬酸浓度为9.3 g⋅L⁻¹。kLa提高至54 h⁻¹时，油脂含量增至20%（w/w），柠檬酸浓度为7.8 g⋅L⁻¹。在kLa为66 h⁻¹时，油脂含量达到最高的26%（w/w），对应油脂浓度5.6 g⋅L⁻¹，柠檬酸浓度为6.5 g⋅L⁻¹。统计分析表明，kLa对油脂含量和柠檬酸浓度均有显著影响（p < 0.05）。
【数据】油脂含量：14%（kLa 44 h⁻¹）/20%（kLa 54 h⁻¹）/26%（kLa 66 h⁻¹）；油脂浓度：5.6 g⋅L⁻¹（kLa 66 h⁻¹）；柠檬酸浓度：9.3 g⋅L⁻¹（kLa 44 h⁻¹）/7.8 g⋅L⁻¹（kLa 54 h⁻¹）/6.5 g⋅L⁻¹（kLa 66 h⁻¹）；显著性：p < 0.05
在最佳条件下（未稀释EBH、2 g⋅L⁻¹ CSL、1.8 g⋅L⁻¹ (NH₄)₂SO₄、kLa 66 h⁻¹），Y. lipolytica W29的微生物油脂组成为：油酸（C18:1）48%、棕榈油酸（C16:1）20%、亚油酸（C18:2）17%、棕榈酸（C16:0）14%。该油脂组成高度不饱和，与植物油相似，适合作为生物柴油原料。
【数据】油酸：48%；棕榈油酸：20%；亚油酸：17%；棕榈酸：14%
#### 3.3.3 两阶段重复批次（TSRB）实验
为进一步提高生物质和油脂浓度，采用TSRB策略进行实验。图6显示了TSRB培养中生物质、葡萄糖和木糖浓度（A）以及油脂含量和柠檬酸浓度（B）的变化。第1阶段（56 h）结束时，生物质浓度达到15.8 g⋅L⁻¹，油脂含量为22%（w/w）。更换新鲜培养基（C/N比100）进入第2阶段后，细胞继续生长，最终生物质浓度达28.5 g⋅L⁻¹，油脂含量为25%（w/w），对应油脂浓度7.1 g⋅L⁻¹。第2阶段中，葡萄糖在约40 h内完全消耗，木糖仍未被利用。柠檬酸在整个培养过程中持续分泌，最终浓度为8.9 g⋅L⁻¹。
【数据】第1阶段生物质：15.8 g⋅L⁻¹；第1阶段油脂含量：22%（w/w）；最终生物质：28.5 g⋅L⁻¹；最终油脂含量：25%（w/w）；最终油脂浓度：7.1 g⋅L⁻¹；最终柠檬酸：8.9 g⋅L⁻¹；第2阶段葡萄糖消耗时间：约40 h
讨论与解读
本研究证实，未脱毒、未稀释的桉树皮水解液可作为Y. lipolytica W29生长和积累微生物油脂的经济有效底物。培养基组成（EBH浓度和补充物）、溶解氧浓度（通过kLa评估）和操作模式是影响生物质和油脂产量的关键参数。提高kLa是改善Y. lipolytica W29油脂生产的最显著因素，这与其需氧特性一致。Y. lipolytica的油脂因组成与植物油相似且富含不饱和脂肪酸，可作为生物柴油产业的潜在原料。该集成生物工艺将大量产生的木质纤维素材料的再利用与增值相结合，体现了支持可持续生物炼制发展的循环生物经济理念。
编译者解读：本研究的方法学亮点在于系统性地解耦了多个工艺参数——从底物浓度、营养补充到氧传质系数和操作模式——逐一优化，这种"因素逐一击破"的策略值得合成生物学研究者借鉴。kLa作为关键调控参数的发现，提示在菌株改造之外，工程层面的氧供给优化同样能显著提升油脂产量。值得注意的是，木糖在整个研究中未被利用，这是该工艺的明显局限——若能通过代谢工程赋予菌株木糖同化能力，总糖利用率将大幅提升。此外，TSRB策略将油脂浓度从批次模式的5.6 g⋅L⁻¹提升至7.1 g⋅L⁻¹，展示了操作模式优化在工艺放大中的价值。
参考来源
期刊：Renewable Energy, 2024
DOI: 10.1016/j.renene.2024.120173
DOI: 10.1016/j.renene.2024.120173