📖 实验教程

细胞长到80%汇合，凋亡率从5%跳到30%，换了GlutaMAX还是压不住？别急着换血清。高密度会把营养耗竭、氨积累、pH漂移和收样假象一起放大。本文按接种、传代、谷氨酰胺供给、换液、收样、检测六段拆...

发酵罐里pH一路往下掉，膜通量却掉得更快。料液进膜不到4小时，通量从40 L/(m²·h)跌到12，酸回收率算出来还不如不耦合。这套系统出问题，八成不是膜本身坏了，而是发酵端、预处理、膜工况、耦合节奏...

做重组蛋白，纯度跑SDS-PAGE是单一条带，活性也过得去，偏偏内毒素检测卡在中间——0.5 EU/μg的线，你测出来1.2。细胞实验一加就出问题，标签上"低内毒素"三个字你都不敢写。这篇就聊亲和层析...

稳定转染的细胞前几代还亮着荧光，传到第八代突然全黑；qPCR 一做，Ct 值从 22 掉到 35 以上。你以为是污染、是质粒丢了、是抗体不好用，重新转染三遍还是这样。大概率问题出在启动子上——CpG ...

无细胞表达跑了一夜，荧光值却趴着不动。别急着换模板、换裂解物。十有八九，镁离子窗口没踩准。这个体系里镁离子管着核糖体组装、tRNA结合、ATP利用，浓度差2 mM，活性可能差一倍。本文从配液低级错误到...

发酵罐DO从60%掉到5%，菌体不长，产物不增，补了氧载体还是没动静。别急着怀疑菌种。供氧不足的坑，多半藏在电极、装液量、乳化、灭菌和工艺匹配里。本文按“先排低级错→再查氧载体选型/乳化/添加/毒性→...

转染48小时收样，WB条带淡得像没转，荧光图里只有零星几个阳性细胞。这种"钱花了、时间搭了、结果没有"的崩溃，做瞬转的人都懂。问题可能藏在质粒质量、转染试剂比例、细胞状态甚至检测时间点里。这篇教程按实...

同一株HEK293，上周还24小时翻倍，换了批血清替代物，48小时只长了一层。你第一反应是污染？别急着扔培养瓶。血清替代物——无血清添加物、血小板裂解液、化学限定替代物——批次差异比FBS更隐蔽。蛋白...

qPCR 反复出现 Ct 偏大、曲线起不来、内参正常而目的基因异常，一稀释样本就“复活”？大概率是抑制物没清干净。一次柱纯化后仍有残留，二次过柱又丢样，是分子实验室最常见的卡点之一。本文从低级错误、上...

跑完SDS-PAGE一看，目标条带比理论分子量大一截，或者说“滞后”了。你的第一反应可能是胶配错了，或者怀疑表达的是融合蛋白。别急着重新配胶。大概率是二硫键没打开——蛋白还维持着部分折叠和交联，在凝胶...

“切了一夜，第二天跑胶一看，目的条带纹丝不动。”这大概是纯化流程里最让人泄气的一幕。你加了酶、换了buffer、也老老实实等了16小时，标签还挂在那儿。问题往往不在酶本身，而在酶与底物的比例、缓冲液里...

接种后2–8小时，pH突然往下掉或往上冲，很多人第一反应是调酸调碱。别急着动泵，早期pH异常大概率藏着染菌、电极漂移、灭菌死角或补料误操作。本文按“低级错误—流程分模块—进阶疑难”给你一套动作链，每个...