📖 实验教程

纯化蛋白最崩溃的瞬间是什么？你按标准流程跑完Ni柱，SDS-PAGE一烤胶，目的蛋白是很亮，但旁边那几条杂带也阴魂不散——宿主蛋白共洗脱了。更麻烦的是，你试着提高咪唑浓度去洗杂，结果目的蛋白产量掉了一...

做EV分离的兄弟，你是不是也遇到过这种情况：BCA定量蛋白浓度挺高，电镜一拍全是碎片和空泡，NTA粒径分布主峰掉到50 nm以下，CD63 Western blot条带淡得像没孵一抗？超速离心后囊泡破...

做配基筛选最怕什么？不是没信号，是信号满天飞。空白对照比样品还亮，换缓冲液也没用，填料洗不下来。你盯着96孔板，怀疑人生。别急着优化方案。大概率是几个低级错误在捣乱。

转染这事，你多半经历过这种崩溃：肽也合成了，脂质体也换了，细胞就是不配合。转染效率低，凋亡倒是很积极。内体逃逸增强肽（比如HA2、GALA、KALA这类）本来是为了帮货物从内体里跑出来，结果实验一塌糊...

液滴PCR的交叉污染，十个有八个不是仪器问题，而是你自己“手滑”。你辛辛苦苦调好的油包水体系，跑出来的阴性对照却亮成一片——那种感觉我太懂了。别急着拆机器或换试剂，大概率是某个低级错误在作祟。这篇教程...

你做表达实验时有没有撞上过这种邪门事：IPTG一加，菌长得还行，可目标蛋白就是不出，或者出几小时就降解干净。更邪门的是，换一批新鲜培养基又正常了。别急着怀疑质粒突变，大概率是诱导剂残留引发的代谢扰动在...

你的gRNA序列是BLAST比对过、特异性评分接近满分的“优等生”。可电转后48小时提基因组，PCR扩增、T7E1酶切，目的条带还是稳稳地只有一条。阴性对照都没这么干净。

半夜发酵罐OD掉到零点几，镜检全是碎片，噬菌体来了。别急着倒罐，先按下面顺序查。本文覆盖从管路死角到排气滤芯的完整链路，让你在两小时内锁定源头。

你盯着WB结果眉头紧锁——体外敲除效率明明>90%的单克隆细胞株，种到小鼠皮下三周，取瘤后检测靶蛋白表达居然回来了。这不是个例。CRISPR编辑细胞株在体内成瘤后出现逃逸，比你想象的更常见。可能是原始...

辛苦纯化出的包涵体蛋白，复性后收率不足10%，或者出现大量沉淀，又或者条带是对的但活性检测就是不过——这种挫败感，做过的人都懂。有没有一种可能：问题不在你表达的蛋白，而在你把包涵体"打开"和"重新折叠...

光照均质问题，是微藻培养里最隐蔽的“慢性病”。你可能已经试过加大光强、延长光照时间，藻却依旧长得稀稀拉拉，甚至干脆贴壁发黄。原因往往不在“光够不够”，而在“光到了没、每颗藻细胞分到的是多少”。这篇文章...

你做质谱前酶解，到底折腾过多久？明明跑了无数遍PNGase F的protocol，N糖位点占用率就是不稳定，低得没法看。问题多半不在质谱，而是酶解上游的系统性偏差。本文覆盖去糖基化、蛋白酶切、肽段回收...