📖 实验教程

做重组蛋白表达，最让人抓狂的不是没条带，而是有带但浅得可怜。你跑完SDS-PAGE，看着诱导前后那微弱差别，心里直嘀咕：是不是稀有密码子拖了后腿？别急着下单做全基因合成。蛋白表达量低的原因有一长串，密...

凝胶过滤跑出一个对称峰，是每个做蛋白纯化的人的执念。现实往往是：峰歪了，前肩鼓出来，拖尾拖到天亮。别急着怀疑柱子报废。九成以上的不对称峰，根源就三件事——上样体积、样品状态、装柱质量。这篇教程从最笨的...

纯化His标签蛋白，UV峰又宽又矮，收集十几管还没到底。杂蛋白跟着一起下来，浓缩后纯度不够。别急着换柱子。峰宽大概率是上样量、梯度体积或延迟体积在捣乱。本文按样品、上样、洗涤、洗脱、柱效五个模块排查，...

连接产物一转化，平板上一片荒芜——十几个菌落，还是空载。你反复检查感受态、抗生素、热激时间，都没问题。问题大概率藏在连接体系里，尤其是载体和插入片段的摩尔比。这篇文章按实验流程拆解，从低级错误到进阶疑...

质粒提取得挺顺，A260/A280 1.8，结果0.8%胶上一看，高分子量条带压着孔，酶切拖尾，转染效率还掉。大概率是碱裂解时基因组DNA冲进了质粒。别急着换柱子。本文把菌液、裂解、中和、上清、沉淀、...

做定点突变，最气人的不是PCR跑不出条带，而是平板上稀稀拉拉长了两三个克隆，挑出来一测序——全是野生型。你盯着那管Dpn I消化的产物，怀疑人生。其实90%的突变失败都卡在两个环节：引物设计不合规，退...

NTC（无模板对照）又出条带了，Ct还在32上下晃。样品还没上机，心里先凉一半。这种假阳性八成不是试剂坏了，是气溶胶污染——扩增产物飘在空气里，落进你的管子里。它不挑人、不挑仪器，只挑操作习惯。本文按...

投了载体、闷曝两周，出水还是浑的，载体捞出来一摸滑溜溜——这是挂膜启动期最常见的翻车现场。别急着换菌种，大概率是载体选错了，或者运行参数把刚贴上去的菌打掉了。下面按「低级错误→分维度系统排查→进阶疑难...

做过克隆的人都懂那个瞬间：提质粒、加酶、37°C水浴一小时，跑胶一看——条带糊成一片。载体没切开的、底下多出一串小星星的、连不该切的地方都碎了的，全赶一块儿。这时候别急着换酶。九成的问题不在酶本身，而...

复孔CV冲到20%，边缘孔一片黄，空白孔也显色。你换了新抗体、重配了标准品，问题还在。大概率是洗板。洗板不是“倒掉液体加新液”这么简单。本文按上样前、洗板中、读板后三段，拆开7个常见故障点，每个点给你...

基因合成做了一周，菌落长得挺欢，Sanger 一测全是点突变、缺失、嵌合。你开始怀疑酶、怀疑试剂、怀疑人生。别急着换试剂盒。多数时候，问题藏在退火温度和重叠区设计里。本文按“低级错误→系统排查→进阶疑...

NTC孔本该干干净净，结果2D图上冒出一串阳性微滴。阈值往左挪，拷贝数翻倍；往右挪，样品又变成0。ddPCR的坑，一半在阈值，一半在污染。这篇教程按实验流程拆成三步：先扫低级错误，再分模块排查模板、引...