📖 实验教程

做细胞培养、微生物发酵或者植物组培，最烦的不是实验本身，而是培养基配好、灭菌一锅出来，pH计一插——好家伙，从7.2直接飙到8.0，或者从6.8掉到5.9。你说补酸补碱吧，调完再灭菌又变回去；你说不调...

做融合基因、定点突变或片段拼接时，重叠延伸PCR（SOE PCR）是性价比最高的方案——两个片段加一段15-20 bp的重叠区，一次PCR就能连起来。但现实是：跑完胶要么只有引物二聚体，要么条带弥散，...

> 辛苦纯化出来的包涵体，复性后蛋白全聚成一团、活性不到10%，或者上清里压根没东西——这是做重组蛋白最崩溃的瞬间。复性效率低，80%不是运气问题，而是流程里某个环节踩了坑。本文按“低级错误→系统排查...

做电转化最让人抓狂的莫过于：质粒没问题、感受态是新买的、电转仪参数按说明书设的，可偏偏转化子就是稀稀拉拉几个，甚至一个不长。你排查了半天电压、时间、质粒纯度，最后才发现罪魁祸首竟然是那点肉眼看不见的盐...

你是不是也遇到过这种情况：目的蛋白纯化后带着His或GST标签，用蛋白酶切了过夜，第二天跑胶一看，条带纹丝不动，跟没加酶一样？或者切出两条带，但大小不对，考染还一片糊。别急着怀疑人生——90%的酶切失...

做转化实验最怕什么？辛辛苦苦提的质粒，涂板过夜后一看，一个单克隆都没有，或者稀稀拉拉长出几个卫星菌落。如果你是新手，第一反应往往是“质粒是不是有问题？”但更多时候，问题恰恰出在感受态制备这一步。CaC...

体外转录（IVT）做mRNA，最怕加帽效率低或完全没有cap-0/cap-1结构。电泳条带忽大忽小、转染后翻译效率暴跌、qPCR检出率异常……问题往往藏在试剂浓度、反应顺序和温育时间这些细节里。本文按...

菌落PCR本应是最省心的筛选手段，可偏偏有时跑胶一看：阴性对照亮着，阳性对照却模糊；条带大小看着对，送去测序却全是重复序列或空载体。这种“假阳性”最闹心，浪费的是时间、试剂和信心。别急着换酶，也别抱怨...

摇瓶发酵看着简单——培养基、摇床、接种、收获，但一染菌就是整批报废。你做完了灭菌、超净台操作、封口膜也裹了三层，结果一夜之间培养基变混浊、pH暴跌、镜检全是杂菌。别急着怀疑人品，染菌的源头其实就那么几...

开箱一支抗体大几千，熬夜跑胶转膜一整天，最后压片一片空白——Western Blot无信号，几乎所有分子生物学人都经历过这种绝望。更崩溃的是，你根本不知道问题出在一抗、二抗、转膜还是显影，只能像无头苍...

辛辛苦苦提完蛋白，配胶、上样、转膜一气呵成，结果显出来却是“鬼脸条带”、“鼻涕拖尾”、或者干脆白板一片，有没有瞬间想连电泳槽一起扔出去的冲动？别急，90%的SDS-PAGE条带异常都不是玄学，而是有明...

你是不是也遇到过——电泳胶上明明该出的条带没出来，不该出的杂带倒糊成一片？或者双酶切做完，回收的片段大小怎么都对不上，重新做三次还是老样子？这锅八成要甩给“限制酶切不完全”和“星号活性”。本篇教程不拽...