来源：DNA Lab Space 实验教程 | 编译：DNA Lab Space
# SDS-PAGE条带又丑又诡异？3步排查法一次给你说清
辛辛苦苦提完蛋白，配胶、上样、转膜一气呵成，结果显出来却是“鬼脸条带”、“鼻涕拖尾”、或者干脆白板一片，有没有瞬间想连电泳槽一起扔出去的冲动？别急，90%的SDS-PAGE条带异常都不是玄学，而是有明确物理化学原因的。这篇教程不扯虚的，我会带着你从最蠢的新手错误一路排查到专家级疑难杂症，全程配具体参数，擦干眼泪跟着操作就行。
第一步：快速排查低级错误
下面这四条，每次翻车请先像念咒语一样过一遍，别跳过，十次故障有八次栽在这里。
1. APS/TEMED引发剂过期了
胶凝得慢、软塌塌甚至根本不凝。解决办法：APS要现用现配10%浓度，分装后-20℃避光保存，超过两周就果断丢弃；TEMED必须4℃避光保存，如果颜色变黄发褐，说明已氧化失效，立刻换新瓶。
2. 蛋白根本没变性就上样了
条带消失或只有一条模糊的高分子量涂抹。解决办法：1×上样缓冲液必须含足量还原剂（如100mM DTT或5% β-巯基乙醇），蛋白样品于95-100℃煮沸5分钟，膜蛋白可延长到10分钟，煮完立刻插冰冷却再点离一下。
3. 电泳缓冲液加错或用成了“老汤”
最常见的是内外槽忘了加SDS，或者外层用过的缓冲液反复回收用三遍以上。解决办法：标准Tris-Glycine-SDS电泳液（25mM Tris，192mM甘氨酸，0.1% SDS）必须内外槽都新鲜添加，内槽一定要加满到淹没电极丝和凝胶上样孔。
4. 上样量太任性
上样体积过多溢出导致交叉污染，或者蛋白量太少啥也看不见。解决办法：考马斯亮蓝染色，一条带目标蛋白量0.5~2μg就能看清晰，上样总体积不要超过梳孔最大容量的80%（比如1.5mm厚胶10孔