📖 实验教程

做qPCR最怕什么？不是目标基因没信号，而是内参CT值忽高忽低，重复孔能差出2个循环，今天跑出来14，明天跑出来18。你盯着熔解曲线怀疑人生，是加样手抖？试剂失效？还是样本降解？别急，这篇教程从“低级...

跑定点突变实验，最崩溃的事莫过于：PCR产物跑电泳，清晰的主带旁边拖着一团模糊的弥散条带，或者干脆条带很弱、位置低到接近引物；转化平板稀稀拉拉几个菌落，挑去测序全是没有突变的野生型。折腾两周，引物重新...

做生物芯片杂交，最怕的不是信号弱，而是背景一片糊。本该是干净的阳性点，结果整张片子上像蒙了一层雾，荧光背景高得压不住，数据没法看。你换了探针、调了温度、加了洗涤，问题还在。别急着扔样品，背景升高通常不...

做Gateway克隆，最怕的就是LR反应之后，平板上稀稀拉拉几个克隆，或者全是空载体、假阳性。你辛辛苦苦PCR好的入门克隆，供体载体也提了，LR酶也加了，结果就是不出带或不长菌，换谁不火大？别急着怪酶...

做蛋白表达最怕什么？不是没表达，也不是包涵体，而是摇了一夜菌，第二天起来一看——菌液变清、瓶子底部一层黏糊糊的东西、闻着还有点臭。没错，菌体自溶了。你辛辛苦苦诱导的蛋白，全被蛋白酶“报销”了。别慌，这...

辛辛苦苦提的RNA，跑完反转录，结果cDNA浓度低到怀疑人生。下游qPCR没CT值，建库直接失败，实验进度卡死。别急着怀疑人生，90%的“产量低”其实都是可以快速定位和挽救的。这篇教程从最基础的加样错...

无细胞蛋白合成（CFPS）是个好技术，但也是最容易让人“血压飙升”的实验之一——同一管提取物，昨天做出来产量2.1 mg/mL，今天变成0.3 mg/mL，换个批次又变成1.8 mg/mL。你以为是自...

做原核表达纯化，最头疼的不是包涵体溶不出来，而是洗涤时“越洗越浑”——离心后沉淀不紧实、上清黏稠、SDS-PAGE杂带一大堆。你以为是裂解不彻底，其实是膜碎片在捣乱。这篇教程专门针对包涵体洗涤去膜碎片...

做克隆实验最怕什么？切胶回收只有对照的一半，跑完胶条带若隐若现；或者测OD260/280比值勉强到1.8，送去测序却永远是"信号微弱"。胶回收这步看似简单，但涉及溶胶pH、盐离子浓度、温度、离心速率四...

做分子克隆最怕什么？不是PCR没条带，而是胶回收后DNA浓度明明测出来有50 ng/μL，酶切37℃孵育了3小时，跑胶一看——还是那条粗亮的片段，纹丝不动。或者更糟，切出来一堆杂带，目的条带反而没了。...

做TA克隆最憋屈的事是什么？菌落PCR有条带，条带大小也对，送去测序回来一看——插入片段是反的，或者一个质粒里连了好几个拷贝。更气人的是，你换了载体、换了感受态，还是偶发出现。别急着怀疑人生，方向错误...

做毛细管电泳，最怕看到本该尖锐的峰变成“前边拖个尾巴”的斜坡——峰型前伸，又叫前沿峰（fronting peak）。你以为是样品浓度太高？其实很多时候是缓冲液、进样量甚至毛细管内壁处理的问题。新手容易...