📖 实验教程

你做适应性进化实验时，是不是遇到过这种情况：传了十几代，菌还是那个熊样，耐受性纹丝不动。或者更糟，进化没看到，菌先死光了。别急着怀疑课题方向，大概率是操作细节出了问题。本文从接种量、选择压力、传代周期...

尾气CO2冲到15%，pH掉到6.8，碱泵一直加，细胞却开始抱团。别急着把空气流量拧到底。CO2高不一定是通气不够，排气堵、pH回路、背压、代谢通量都可能搅局。这篇按快速排查、分维度系统排查、进阶疑难...

做细胞周期同步，血清饥饿是成本最低的一招。可镜下飘一层，Annexin V一测阳性率30%以上，后面所有实验全废。问题多半不在"凋亡"本身，而在饥饿浓度、时长、铺板密度和检测环节。下面按先查低级错误、...

发酵罐里菌体长得慢，pH和溶氧看着都正常，补料也没断——很多人第一反应是染菌或者质粒丢了。查完一圈没毛病，最后问题出在培养基里那几个毫克级的金属离子。微量元素缺一点，比生长速率μ能从0.35 h⁻¹掉...

你配好20 µL反应体系，加样、上油、封膜、压盖，机器跑完一看——液滴数只有8000，管底还糊了一层合并的大液滴。第一反应是引物问题？先别急着换模板。数字PCR里液滴生成少、合并、大小不齐，十有八九是...

跑了一夜HPLC，早上打开工作站，基线飘得像过山车——这是很多人的日常。峰面积忽大忽小，保留时间对不上，甚至鬼峰乱入。你以为是柱子坏了？八成是流动相里的气泡在捣鬼。本文从脱气手法、梯度设置到在线脱气机...

跑完胶，打开凝胶成像仪，条带像被水泡过的墨迹——边缘发散、拖尾、甚至整个泳道糊成一片。这种崩溃感，做过核酸电泳的人都懂。条带模糊不是单一原因，胶浓度、电压、缓冲液、上样量都可能插一脚。本文按"先查低级...

做蛋白纯化，最怕离心后看到管底那坨黏糊糊的沉淀。上清没目标，沉淀里全是杂带？别急着扔。盐析梯度没摸好，目标蛋白照样沉。今天聊透：从低级错误到进阶疑难，怎么一步步把聚集沉淀问题拆开。覆盖硫酸铵梯度设计、...

细胞养着养着就变慢、飘、黑点？支原体污染最会装。PCR跑完没带、弱带、假阳性，一天白干。本文覆盖取样、提取、PCR体系、程序、对照、进阶疑难，给你能直接照做的排查路径。别猜，按顺序来。

你兴冲冲跑了SDS-PAGE，结果上清空荡荡，沉淀条带粗得刺眼。换了低温、降了IPTG，还是包涵体。于是你共表达了分子伴侣——GroEL/GroES、DnaK/DnaJ/GrpE都试了，可溶条带依然没...

补料泵一直转，乙酸还是冲到5 g/L？OD涨到一半卡住，产物得率直接腰斩。这类问题八成不在菌种，而在碳源流加的节奏和配套参数上。下面按「低级错误→分模块排查→进阶疑难」三层展开，覆盖初始糖浓度、补料启...

跑cIEF，最怕的不是没峰，是峰像被擀面杖压过：宽、矮、拖尾，pI标记也聚不拢。你换柱子、加电压、调pH，折腾一下午，结果还是糊。问题大概率不在仪器，而在两性电解质、样品基质和聚焦条件这三块。下面按“...