📖 实验教程

你诱导的蛋白又没信号？跑胶一看，诱导前后条带没差别。或者，目标带有了，但比脸还淡。原核表达里，温度是最容易被忽略又最致命的变量。37°C摇过夜，包涵体一堆；16°C摇两天，产量还是低。别急着换载体。本...

跑完SDS-PAGE，泳道里空空如也，或者洗脱峰矮得像个小土包。上样前明明看见菌液有表达，破菌上清也有带。问题出在哪？多半是咪唑竞争没打够，也可能蛋白压根没挂上柱。这篇按实验流程拆成上样、洗涤、洗脱、...

发酵罐泡沫顶到排气口，你赶紧补加消泡剂。泡沫压住了，菌也不长了，蛋白表达量直接腰斩。大概率是消泡剂过量或类型选错。本文覆盖从低级错误到系统排查，再到进阶疑难，帮你把泡沫和毒性问题一次拆解。别急着倒掉发...

包涵体像砂纸，8 M尿素加进去还是浑，离心后上清不到一半，上柱堵、复性白浊。你明明加了变性剂，为什么溶不动？大概率不是蛋白“没救”，而是浓度、pH、还原剂、体积或温度里有短板。本文按“低级错误—流程维...

跑完胶，染完色，一看条带全是"彗星尾巴"，往下拖出一片虚影。Marker也拖，样品也拖，重复三次还是拖。这种时候别急着换抗体、换样品，大概率是凝胶本身出了问题——聚合不均、孔径不一，蛋白跑进去就像在坑...

收了一整管菌，柱子一过，NanoDrop一测——35 ng/μL，A260/A280 还有1.6。这场景你肯定见过。浓度低不等于质粒提不出来，多数时候问题就藏在"培养多久""接了多少菌"这种看似最简单...

转化后过夜培养，平板上本该是稀稀落落的单克隆，结果主菌落周围冒出一圈针尖大的小菌落。挑吧，怕全是空载；不挑吧，又怕错过真阳性。这种“卫星菌落”现象在氨苄青霉素平板上尤其常见，大概率是你抗生素浓度、平板...

连续发酵跑了十几个小时，OD本来稳在8，突然往下掉；截留液越来越稀，渗透液却越来越浑。同一时间，TMP一路飙升，通量腰斩，膜堵了。这两件事几乎同时出现，不是巧合，是同一套系统里上下游互相咬合的结果。下...

标准曲线低浓度爬不动，高浓度一针就平？别急。生物传感器线性范围窄，膜厚度大概率是元凶。膜太厚，底物进不去，酶没饱和，扩散先饱和。膜太薄，酶载量低，信号又飘。本文从电极预处理、膜液配制、滴涂旋涂、交联干...

固定化细胞刚做完活性还行，培养12小时就掉一半？别急着换细胞。大概率是载体孔径在作怪。孔径太小，底物和氧气进不去，代谢废物出不来。孔径太大，细胞漏得比保留还快。本文从低级错误到进阶疑难，按实验流程拆开...

单细胞建库做到 cDNA 产量低，最让人崩溃。细胞明明在，裂解也做了，qPCR 却 Cq 30+，Bioanalyzer 只剩一堆引物峰。十有八九是逆转录这步没跑通。本文把 Smart-seq2、10...

跑完LC-MS/MS，搜库结果覆盖率只有25%，你盯着那堆长肽发懵。酶切时间到底够不够？37°C过夜是不是太短？还是酶早就失活了？本文把质谱肽段覆盖率低的酶切相关原因拆成快速排错、分维度系统排查、进阶...