📖 实验教程

做CRISPR筛选最怕什么？不是细胞死了，不是测序深度不够，而是你辛辛苦苦转染完、提完基因组，一看覆盖度——300倍？500倍？该有的sgRNA少了一半。别人发文章文库覆盖度动辄1000×，你连300...

做分泌表达最气人的是什么？目标蛋白明明在细胞内一堆，培养基里却少得可怜；换了文献里推荐的热门信号肽，产量不升反降；甚至信号肽没切除、蛋白降解成碎片……这些坑我全踩过。今天这篇教程不聊虚的，直接按“从低...

做纯化的同行都懂，填料用久了总要再生。但最让人窝火的就是——明明按 SOP 再生了，结果柱效不仅没恢复，反而比再生前还差，HETP 疯狂飙高，峰形拖尾严重。这期教程就专门来撕开这个“再生后遗症”的锅，...

做杂交瘤实验，最怕的不是没结果，而是费尽心思融合、筛选，最后拿到一堆不分泌抗体或者分泌了却失活的克隆。细胞不生长、阳性率低、抗体特异性差，每一个坑都让人头疼。更麻烦的是，这些问题往往不是单一原因造成的...

做流式分选最崩溃的瞬间，不是你设门设到眼花，而是明明上样了10万个细胞，分选完一数，回收率不到30%。更气人的是，仪器参数看着全正常，样本也没问题，可细胞就是“人间蒸发”了。别急着怀疑人生，回收率低这...

做克隆最崩溃的瞬间，莫过于从-80℃冰箱里掏出一管感受态，冰上融化后加质粒热激，涂板过夜，第二天一看——空白得刺眼。转化率从10⁸掉到10⁴甚至零，这种“冻融后失灵”的怪病，新手遇到十有八九直接怀疑质...

辛辛苦苦做了密码子优化，合成新基因，转进去一看——表达量比野生型还低了30%甚至更多。是不是很崩溃？别急着怀疑人生，这个问题在实验室里太常见了。密码子优化不是简单的“换成高频密码子”，它牵涉到mRNA...

做聚羟基脂肪酸酯（PHA）的兄弟姊妹们，是不是经常遇到这种情况：菌长得很肥，摇瓶里pH也降了，但最后离心收菌体一称，PHA干重不到细胞干重的30%，甚至只有10%？更气人的是，重复三次结果还能差出一倍...

做His标签蛋白纯化，最怕的不是没挂柱，而是明明跑的Ni柱，洗脱下来条带又淡又杂，得率低到怀疑人生。更气的是，镍柱用了没几次，颜色发白、结合量暴跌，再生也救不回来。这期教程就把「得率低」和「镍柱再生」...

发酵罐跑得好好的，突然OD值断崖式下跌、pH异常回升、泡沫增多，镜检看到菌体破碎——大概率是噬菌体污染。尤其在大肠杆菌或乳酸菌的高密度发酵中，噬菌体污染来得快、死得彻底，一批几万块的产物几分钟内报废。...

建库明明按Protocol一步步来的，Qubit浓度也像模像样，怎么一到Bioanalyzer或者TapeStation就“花屏”了？要么没有主峰，要么接头二聚体高得离谱，要么峰形拖尾像条死蛇。更崩溃...

做厌氧发酵产丁醇，最怕的就是辛苦养了好几天，最后GC一测，丁醇浓度不到1%（v/v），甚至更低。培养基、菌种、厌氧环境、代谢调控，每个环节都可能让产量“腰斩”。新手往往急着调菌株或加前体，却忽略了一堆...