📖 实验教程

诱导完跑SDS-PAGE，上清一条带都没有，沉淀里全是目标蛋白。你换了宿主、降了温度、把IPTG压到0.1 mM，包涵体还是照旧。别急着从头克隆。可溶性差有一半出在表达条件，另一半得靠分子伴侣系统救。...

泡沫顶到罐顶、排气口逃液、染菌、整批报废——做发酵的都懂这种痛。消泡剂一倒，泡沫下去了，两小时后涨得更凶；多加几毫升，菌体不长、溶氧掉底。到底加多少、什么时候加、为什么必须分批加？这篇按“低级错误→流...

发酵罐DO掉到20%以下，菌体长得慢，产物也不出。你加通气、提罐压，DO还是不稳。大概率不是氧气不够，而是气泡没被打散，循环也没跟上。本文从DO电极校准、供气管路、挡板与装液量，一路查到桨型组合、桨径...

昨天下班前把连接体系放进PCR仪，今早涂板，下午一看——白茫茫一片，一个菌落都没有。比“长满”更让人难受的是“全空”。别急着重新连接，问题大概率不在连接本身。这篇把连接、转化、筛选三段流程拆开，给你一...

PI染色做细胞周期，最怕什么？同一批样，有人跑出漂亮G1/S/G2峰，你的一团糊。固定时间只是表面，乙醇浓度、加液速度、RNase、上机前过滤都影响结果。别急着重做，先按下面顺序看，大概率能找到问题。...

跑胶前 marker 一上样，跑完发现条带糊成一片、小片段挤成一坨、泳道歪歪扭扭。第一反应是"marker 坏了"，换支新的还是老样子。其实九成问题出在你那缸跑了八次没换的缓冲液上。这篇从配液、配胶、...

跑完提取，Nanodrop一点，A260/A280显示1.62。样品不敢用，重提又搭进去一整天。这个比值到底在告诉你什么？是蛋白没除干净，还是仪器在骗你？这篇按“上手先查的低级错→分流程系统排查→少见...

细胞培养一上高密度，乳酸和氨就往上顶；切到灌流模式，泵一开，细胞不是飘了就是活率往下掉。别急着整批换液。这篇按“先快筛低级错，再按流程拆故障”的路子，把灌流切换前后最容易踩的坑一次说清：切换前细胞状态...

细胞长得慢、培养液不浑但pH天天飘，PCR一测又是阳性。抗生素联合清除做了两周，停药三天又复发——这事太常见。支原体没有细胞壁，能躲进细胞、能搭血清便车，还能在移液器里飘。本文按“确认污染—选药—用药...

底物一加就掉速？水相浓度刚上去，菌就蔫了。两相体系不是倒点有机溶剂就完事。相比、logP、界面面积、底物分配、产物毒性，任何一项偏了都能把转化率打回原点。下面按从低级错误到进阶疑难，把微生物转化底物抑...

酶切跑胶条带亮得刺眼，切胶回收一测浓度只剩12 ng/μL。连接转化，板子上干干净净。这种“看得见、收不回”的崩溃，做过克隆的人都懂。问题大概率不在酶切本身，而是藏在切胶、上柱、洗脱这几个手工程序里。...

发酵罐上的DO电极，昨天还正常，今天校准要等半天，灭菌后响应像慢动作。你等它从100%降到0%，它还在半路晃。别急着换探头，大概率不是电极报废。下面按“低级错误—系统排查—疑难场景”走一遍，覆盖膜帽、...