来源：蛋白表达无带稀有密码子（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
你做诱导表达，SDS-PAGE上目的带没了。诱导泳道跟空载差不多。考染看不见，His抗体也没信号。别急着把锅甩给稀有密码子。先分清是没表达、表达太低、被降解，还是样品根本没进胶。本文按构建序列、宿主菌、诱导条件、样品处理逐段排查，重点讲清稀有密码子成簇、tRNA丰度不足、密码子优化后仍无带怎么处理，参数可直接照做。
第一步：快速排查低级错误
- 读码框错位：His标签和目的基因不同框，抗体当然抓不到。解决：用序列查看软件从ATG翻译到终止密码子，确认标签连续、没有提前终止。
- 质粒没转进去或丢了：菌液PCR没条带，诱导半天白忙。解决：新鲜转化，LB加对应抗生素，氨苄100 µg/mL或卡那50 µg/mL，挑单克隆做菌液PCR。
- 诱导前OD没控好：OD600低于0.4或高于1.2都容易翻车。解决：1:100转接，37°C、220 rpm摇到OD600 0.