来源：蛋白纯化电导升高盐析、发酵pH骤降污染排查、细胞培养黑点颗粒支原体、核酸电泳条带弱上样量、质谱峰面积低进样针堵、克隆转化子少感受态效率、蛋白表达量低宿主菌株、发酵菌体自溶发酵时长（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
纯化做到一半，电导从16 mS/cm飙到80 mS/cm，目标蛋白开始发浑。别急着倒掉。这画面太常见。问题大概率出在缓冲液、盐析操作、层析系统残留或超滤换液。本文按“快速排低级错—分流程查电导和盐析—进阶疑难”走一遍，给你能直接上手的时间、体积和电导值。
第一步：快速排查低级错误
- 盐称错或母液算错：配20 mM Tris pH 8.0 + 150 mM NaCl，25°C电导约15–17 mS/cm；读到80 mS/cm，先看1 L水是不是加了58.4 g NaCl而不是5.84 g。解决：重配，电导仪25°C校准后再测。
- 母液稀释倍数搞反：5 M NaCl母液按1/10加会到500 mM，不是50 mM。解决：1 L体系加5 M母液30 mL才到150 mM，用C1V1=C2V2算完再倒。
- 样品没换液直接上柱：发酵上清电导常>40 mS/cm，直接上Q柱目标蛋白大概率流穿。解决：用20 mM Tris pH 8.0稀释5–10倍，或透析2 h换液3次。
- 电导仪没温度补偿：同一缓冲液25°C和4°C读数差一截。解决：25°C校准，0.01 M KCl验证，电极用0.1 M HCl浸泡5 min后纯水冲净。
第二步：分维度系统排查
1. 缓冲液与样品电导不匹配
现象：目标蛋白出现在流穿峰，柱后电导高于上样电导；收集液加硫酸铵后发浑。
原理：Q柱上样电导>20 mS/cm，盐离子会跟蛋白竞争结合位点；低盐缓冲液里目标蛋白稳定，高盐反而容易盐析。
解决：上样前25°C测电导，稀释到<15 mS/cm；20 mM Tris pH 8.0透析2 h换液3次，透析液体积≥20倍；硫酸铵按0–40%饱和度分级，4°C搅拌30 min，12,000×g离心20 min。
验证：上样液、流穿、洗脱峰跑SDS-PAGE；电导仪复测上样液；目标条带应回到洗脱峰。
2. 盐析复溶与换液操作不当
现象：硫酸铵沉淀复溶后浑浊，离心有胶状沉淀；电导降不下来。
原理：硫酸铵残留让电导升高，直接上柱会二次盐析；复溶体积不足，局部盐浓度过高。
解决：沉淀用20 mM Tris pH 8.0复溶，体积为原液1/5–1/10；4°C