来源：蛋白表达诱导剂残留代谢扰动（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
诱导表达最怕什么？加完IPTG，菌液OD不涨，目标条带还一天比一天淡。纯化后活性低，你换载体、换宿主，问题还在。大概率不是表达系统本身，而是诱导剂残留把代谢拖垮了。这篇按实验流程拆排查：先扫低级错误，再分诱导前、诱导中、诱导后和下游四个维度找原因，最后给高密度发酵和乳糖诱导的特殊坑。每个原因都给判断、验证和解决动作，照着做就能把变量压下去。
第一步：快速排查低级错误
1. IPTG母液浓度记错。把1 M母液按1:1000加，终浓度直接到1 mM，常用值其实是0.1-0.2 mM；解决：配100 mM母液，0.22 µm过滤，-20°C分装，按1:1000加。
2. 诱导时OD没看准。OD600到0.6-0.8才加IPTG，超过1.2再诱导，菌已进入稳定期，代谢状态差；解决：每30 min测一次OD，到0.6立刻诱导。
3. 37°C摇过夜。37°C诱导3-4 h足够，过夜菌体自溶，pH常掉到5.5；解决：37°C 3 h或16°C 16-20 h，到点立刻收菌。
4. 取样后室温放着。残留IPTG继续诱导，蛋白酶释放，条带很快变弱；解决：取样立即冰浴5 min，4°C 8000g离心5 min，弃上清，沉淀用预冷PBS洗一次。
第二步：分维度系统排查
1. 诱导剂浓度过高与代谢溢流。 现象：加IPTG后1 h OD停止增长，培养基pH低于6.0，乙酸积累到2 g/L以上。原理：IPTG持续打开lac启动子，浓度越高代谢负担越重；大肠杆菌快速生长时容易溢流产乙酸，抑制菌体。解决：做0.05、0.1、0.25、0.5 mM梯度，常用0.1-0.2 mM；培养基加50 mM磷酸盐缓冲，pH 7.