来源：蛋白亲和层析洗脱峰前延pH梯度（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
蛋白A柱上样时一切正常，一到洗脱就出问题。峰前面鼓个包，后面拖条尾，收集体积从3 mL变成8 mL，浓度却掉了一半。你以为是柱子脏了，洗了三遍还是老样子。问题大概率不在柱子，就在pH梯度本身。这篇教程按“低级错误→缓冲体系→延迟体积→柱床→样品”五层往下排查，每个原因都给出判断、验证、解决的具体动作，pH值、CV数、流速全写实。
第一步：10分钟排掉4个低级错误
1. pH计没校准就配洗脱液。 电极老化或校准液过期，标称pH 2.7的0.1 M glycine-HCl实际可能只有2.3。解决：每天用pH 4.01和7.00两点校准，配完在25°C复测，偏差超过0.1就重配。
2. 洗脱液没脱气。 气泡卡在柱头筛板，峰形立刻歪。解决：0.22 µm滤