📖 实验教程

你昨晚再生的那批内毒素去除膜，今天处理阳性菌蛋白时又超内毒限值了。滤速倒是正常，膜也没堵，可洗脱液跑完ELISA就是压不下去。更气人的是，这已经是这批膜第三次再生了——前两次明明都好的。问题出在哪？别...

你盯着氢气分压曲线，它像心跳图一样上下乱跳。补料泵一开，氢分压就飙；泵一停，产气就掉。培养基耗了一堆，目标产物却没见涨。这个节骨眼上，没人想从头读一遍发酵手册。你只需要知道：哪里坏了、怎么查、怎么修。

做无细胞表达，最怕的不是没蛋白，而是蛋白全在沉淀里。你换了分子拥挤剂，从PEG 3350换到Ficoll 400，甚至加了海藻糖，结果跑SDS-PAGE一看——上清干净得像水，沉淀里什么都有。这活儿不...

做蛋白翻译后修饰（PTM）质谱鉴定，最怕什么？样品跑了，数据处理完，结果一查——关键修饰位点一个都没看到。磷酸化信号弱、泛素化肽段压根没检出、富集完上样量不够……这些坑你大概率都踩过。别急着怪质谱仪，...

双激光多色方案里，你调完补偿，目标荧光信号直接腰斩——这事我见过太多次。有人赶紧加大抗体用量，有人甚至换荧光素，结果问题根本不在那儿。补偿溢出扣多了、单染对照设错了、激光延迟没对齐，任何一个都能让你的...

养细胞最怕什么？不是污染，是pH漂移。明明昨天细胞还圆润透亮，今天一早全飘了；培养基颜色从樱桃红变橙黄甚至紫红，你以为是换液间隔太长，结果换了新鲜培养基，细胞照样不长。问题大概率出在碳酸氢钠缓冲系统上...

做哺乳细胞重组蛋白，转染做了，Western blot 也跑了，结果条带淡得像幻觉。你换了转染试剂、加了DNA量、延长了收样时间，还是老样子。

养细胞不难，难的是让它们乖乖排队。你按文献设了胸苷浓度，放过夜，第二天高高兴兴去测流式，结果G1峰和S峰糊成一片，或者释放后取材，蛋白条带忽紫忽黑。问题大概率出在药物浓度和释放时间这两个参数上。本文把...

你守了一下午Seahorse，探针板水化了、细胞种好了、仪器校准也顺利过了。结果底物一打进去，OCR曲线平得像死海，ECAR像个刚跑完百米的人——飙得离谱。你盯着屏幕，第一反应是细胞死了？机器坏了？还...

你是否有过这样的经历：目的蛋白在亲和层析上洗脱峰像是“提前溜出来”——峰前有一个缓坡，pH明明该线性下降，结果前段直接跳水。换缓冲液、换柱子，峰形依旧难看。别急着怪填料，大概率是你忽略了一些基础细节。

电泳图上目标条带亮得晃眼，割胶回收后测序却叠峰乱跳、脱靶位点成片出现。你大概率把不该切的胶块切下来了，或者纯化流程里混入了非特异产物。别急着换引物重做，先按下面几步排查，大多数污染在30分钟内能定位。

分选前细胞活率95%，分选完上机一测只剩60%。这种落差你经历过吗？先别急着怪仪器、怪样品。大概率是你没把鞘液当回事。本文专治“分选后细胞批量死亡”，覆盖鞘液渗透压的核心排查路径，从低级错误到进阶疑难...