酵母发酵菌体自溶氮源补加策略

来源：酵母发酵菌体自溶氮源补加策略（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space

📎 相关工具：质粒载体构建校验

发酵中后期OD往下掉，上清蛋白和A260往上窜，pH莫名回升，镜检碎片越来越多。先别急着换菌株，大概率是氮源补加时机、类型、速率或C/N失衡。本文按低级错误、流程分维、进阶疑难三层排查，把补氮动作拆到能直接上手。

第一步：快速排查低级错误

1. 补料液灭菌过头。酵母浸粉、蛋白胨121°C 20 min易结块沉淀，改配20%母液用0.22 μm过滤，或115°C 15 min。

2. pH探头没校准。补氨水直接把pH顶到6.5以上，用pH 4.01和6.86两点校准，灭菌后复测，死区设0.05。

3. 补料管路串液。糖和氮源分开补时残留葡萄糖，补前用75%乙醇冲30 s，再用无菌水冲1 min。

4. 只看OD不看活率。OD600高但美蓝染色死细胞>10%，后面自溶是迟早的事。每6 h测活率，低于90%就减速补料。

第二步：分维度系统排查

1. 氮源类型选错。现象：补硫酸铵后pH快速掉、菌体发灰，后期上清A260升高。原理：无机氮吸收快，过量铵抑制呼吸并造成渗透压波动；有机氮释放慢，更适合维持期。解决：生长期用25%氨水调pH兼补氮，维持期改20%酵母浸粉+10%蛋白胨母液，按0.5 g/L/h补。验证：测上清氨氮，控制在50-150 mg/L；残糖保持5-10 g/L。

2. 补氮