来源：qPCR扩增效率低引物二聚体熔解曲线（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
qPCR跑完，标准曲线斜率不对、NTC起峰、熔解曲线多出小峰，这三件事经常一起出现。别急着换试剂盒。先分清是引物二聚体、模板抑制，还是程序设置问题。本文按上机流程拆成三步：先扫低级错误，再分体系、程序、模板、分析四维排查，再处理高GC、低丰度和同源基因干扰。每个原因都给你判断动作、验证方法和解决参数，照着做，少走两轮夜班。
第一步：快速排查低级错误
- 引物母液100 μM直接加？qPCR工作浓度常用0.2–0.5 μM，先把引
