来源：多肽固相合成偶联率低缩合试剂（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
Kaiser test一蓝，粗肽峰一堆，目标峰掉到30%。别急着换树脂。偶联率低，缩合试剂、碱当量和水分占大头。本文按“基础错误—流程分维—疑难杂症”走一遍，给你能直接抄的参数和验证动作。覆盖DIC/HOBt、HBTU/HOBt、HATU/HOAt体系，从溶胀到封端。
第一步：快速排查低级错误
1. 缩合试剂受潮结块：HBTU/HATU开封后吸潮，称量时结块。换新分装，0.5 M现配DMF溶液，4°C保存不超过7天。
2. DIPEA加少了或加错顺序：2 equiv碱撑不起HBTU活化。按氨基酸2-3 equiv配DIPEA 4-6 equiv，先加氨基酸和缩合试剂，最后加碱。
3. 树脂取代度算错：把0.8 mmol/g当0.4用，当量全错。按厂家COA取代度重算，取0.3-0.5 mmol/g树脂更稳。
4. 脱保护没脱干净就缩合：20%哌啶/DMF只洗1次5 min，Kaiser还蓝就加料。改2×5 min+15 min，DMF洗5次再缩合。
第二步：分维度系统排查
1. 树脂溶胀与脱保护
现象：树脂抱团、Kaiser深蓝、偶联后颜色发黑。原理：DCM溶胀不足，位点被包埋；哌啶浓度低或时间短，Fmoc未脱净，N端被占。解决：树脂先用DCM 10 mL/g溶胀30 min，DMF洗3×1 min；20%哌啶/DMF 2×5 min+15 min，室温；DMF洗5×1 min。验证：取5-10粒树脂Kaiser test，无色/淡黄再缩合；脱保护液在301 nm测Fmoc释放量，和理论值对。
2. 缩合试剂