来源：AAV载体基因组滴度低定量引物（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
qPCR跑完，滴度只有1×10¹¹ vg/mL，隔壁组同样批次轻松上5×10¹²。你把体系重配一遍，Ct值纹丝不动。别急着换试剂盒。AAV基因组滴度偏低，九成问题卡在三个地方：衣壳没裂开、引物踩在ITR上、标准品本身不准。下面按排查顺序走一遍，每一步都给判断标准、验证动作和具体参数。照着做，半天内基本能锁定原因。
第一步：先查这几个低级错误
1. 衣壳没裂解就上机。 表现是所有样品Ct都在30以上、阳性对照也偏高。AAV衣壳极耐热，基因组不释放，Taq酶根本够不着。解决：取5 µL样品，加蛋白酶K至终浓度200 µg/mL，55°C孵育1 h，再95°C灭活10 min；或者直接95°C变性10 min后立即冰浴。
2. 引物工作液浓度配错或反复冻融。 表现是标准曲线整体右移半个循环、复孔离散度大。解决：