📖 实验教程

IPTG加了，OD也到了0.6，诱导后跑SDS-PAGE，目标条带淡得像没长出来。别急着换载体、换宿主。表达量低，八成卡在启动子强度、质粒拷贝数、诱导条件这三处。本文按“先查低级错误→再分模块系统排查...

做包涵体复性的人都见过这种画面：6 M 盐酸胍里蛋白溶得好好的，一稀释就白茫茫一片；或者透析袋里本来清亮，过夜之后袋底一层絮状物。你以为是蛋白本身不好搞，其实90%的翻车都藏在几个固定环节里。这篇按"...

洗脱峰拖尾这件事，跑胶的人几乎都碰到过。目的条带明明在，峰却从前一管拖到后一管，杂带混进来，收率还低。更烦的是柱子用着用着发白，Ni²⁺跟着蛋白一起下来。本文从低级错误到进阶疑难，把上样、洗涤、洗脱、...

跑完胶，主带上面飘着两条杂带，或者下方拖出一片涂抹，扩增效率还掉了一半。很多人第一反应是"退火温度再调高2°C"，调完杂带没了，主带也弱了。其实非特异条带的来源不止一个，温度只是最容易被怀疑的那个。这...

转化涂板后只长几颗，甚至一颗没有。你怀疑质粒，其实感受态才是重灾区。CaCl2法制备、-80°C冻存、42°C热激、SOC复苏、抗生素平板，每一环都能把效率从10^8打到10^4。本文按“快速查低级错...

抽质粒，浓度只有30 ng/µL？别急着怪柱子。裂解和中和时序，大概率是重灾区。本文从新手低级错误，到按流程分维度排查，再到低拷贝质粒、内源核酸酶等进阶坑，给你具体体积、时间、温度。照着做，能定位大部...

厌氧箱里那支指示剂，昨天还是粉的，今天该白不白？或者刚换完气就红给你看？别急着换整箱催化剂。氧残留指示剂是厌氧环境的“最后一道脸”，它翻脸通常不是单一原因。本文按“低级错误→分流程排查→进阶疑难”三步...

辛辛苦苦配好的培养基，灭菌锅一开，颜色深了一个度，闻着还有点焦糖味。摇瓶接上菌，6小时过去OD600还是0.1，延滞期长得离谱，重组蛋白表达量掉一半。这时候你怀疑菌种、怀疑感受态、怀疑摇床，就是不怀疑...

回收率上不去，别先怀疑仪器。SPE柱子填料活化没做对，目标物大概率穿柱了。本文按流程拆：快速排错、分维度系统排查、进阶疑难。每个点给现象、原理、解决、验证。你照着做，能自己找到问题。

做了三天，转化板上一片荒芜，对照板却长得好好的——这大概是酵母实验里最让人血压升高的场景。明明protocol没改，上周还能长出几百个克隆，这周只有个位数。问题到底出在感受态、DNA，还是热激那一步?...

做结晶的人都有过这种时刻：坐滴板摆了十几块，显微镜下全是棕褐色沉淀或清亮液滴，一颗晶体都没有。出晶率低，八成不是蛋白"不行"，而是沉淀剂筛选策略出了问题。本文从样品、沉淀剂类型、浓度、pH、温度到添加...

发酵罐泡沫顶到排气口，你手一抖加了消泡剂，结果OD600不涨、耗糖停、DO反弹。别急着倒罐。泡沫和消泡剂常互相背锅。本文覆盖大肠杆菌、酵母、丝状真菌发酵，从低级操作、培养基与工艺、消泡剂种类/浓度/添...