📖 实验教程

支原体污染是细胞房的隐形炸弹。更气人的是，明明细胞状态一塌糊涂，PCR却干净得像新买的。假阴性坑过太多人。问题多半不在试剂盒，而在样本富集这一步。本文按取样、提取、扩增、判读四轮往下捋，给你一套能直接...

早上跑标样峰形还挺利索，下午同一根毛细管就拖尾、分叉、峰面积飘。换上"新配"缓冲液也没好？别急着拆卡盒换柱子。十有八九，问题出在你那瓶看着还清的缓冲液里。本文按"先扫低级错误、再分维度系统排查、最后啃...

发酵到一半，OD不升反降，溶氧突然飙高，pH往上走，镜检全是碎片。你第一反应是染菌？别急着倒罐，大概率是噬菌体。这东西传播快，一罐中招，整个车间都悬。今天按流程给你一套溯源排查动作，从10L小试到50...

标签切不掉，是最让人抓狂的一类实验问题。你明明加了TEV酶，4°C孵育过夜，第二天跑胶一看，未切带还是粗粗一条，切出来的目的带细得像蚊子腿。更气的是，同一天切的另一个蛋白完全正常。这说明什么？酶没坏，...

做CHO灌流或fed-batch，最怕镜检一看：细胞抱成大团，活率掉、蛋白表达跌。你以为是搅拌太快？调低转速，团更多。别急。结团是剪切、离子、操作、通气多因素叠加的结果。本文按“先查低级错误→再按流程...

转化板上空白一片，或者全长克隆一个没有、空载菌落长满板——做过无缝克隆的人都懂这种崩溃。重叠区是无缝克隆最容易翻车的一环：引物多一个碱基、Tm低了两度，组装效率能从80%掉到5%。这篇教程按「低级错误...

分泌表达最气人的场景：胞内能做出包涵体，上清却像没转过。你换信号肽、降温度、补诱导剂，WB还是干净得离谱。问题常不在“分泌”两个字，而在信号肽途径、切割、转运和检测链条。本文按构建、培养、诱导、周质提...

做克隆最崩溃的事是什么？连接产物刚转化完，平板干干净净。你以为是连接出问题，重做一遍，还是零。转头测了一下感受态效价，只有10⁵ cfu/μg，离10⁸差了一千倍。大部分人第一反应是换试剂盒、换钙离子...

生物反应器里DO电极慢半拍，比探头彻底坏更烦。补氧晚，细胞先缺氧；通气过量，剪切和泡沫又上来。离线测着正常，在线却像“延迟直播”。本文按低级错误、系统排查、进阶疑难三段走，覆盖极谱/光学电极膜、电解液...

你的CRISPR实验又脱靶了？目标基因没敲掉，全基因组测序却冒出一堆意外突变。别急着换细胞系。脱靶率高，八成不是Cas9本身不行，而是gRNA设计、递送方式或检测方法踩了坑。这篇教程从新手常犯的低级错...

做昆虫细胞表达，最怕滴度测出来今天8×10^7，明天2×10^6。不是病毒变了，是操作细节没锁死。这篇把TCID50、空斑法、qPCR三种滴度测定从细胞状态到判读标准拆开，给你能直接照做的排查路径。不...

提取仪跑完，上清看着清亮，qPCR却整体晚3-5个Ct，复孔之间还跳。换试剂盒、换引物，问题照旧。别急着怪酶。八成是磁珠或洗液残留跟着核酸进了扩增体系。磁珠本身吸附Taq聚合酶，乙醇和胍盐直接压住反应...