来源：大肠杆菌转化效率低感受态制备（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
转化涂板后只长几颗，甚至一颗没有。你怀疑质粒，其实感受态才是重灾区。CaCl2法制备、-80°C冻存、42°C热激、SOC复苏、抗生素平板，每一环都能把效率从10^8打到10^4。本文按“快速查低级错误→分流程系统排查→进阶疑难”的顺序，给出判断、验证和解决动作。覆盖DH5α、BL21、电转、连接产物等场景，参数具体到时间、温度、转速、浓度。
第一步：快速排查低级错误
1. 抗生素平板失效？先看阳性对照。Amp平板100 μg/mL，卡那50 μg/mL，4°C放超过1个月就换新。用已知质粒涂板，不长就是平板问题。
2. 热激后直接涂板？别省SOC。42°C热激45 s，立刻冰浴2 min，加900 μL SOC，37°C 200 rpm复苏45-60 min。
3. 感受态反复冻融？大概率效率崩了。分装50-100 μL/管，干冰速冻，-80°C保存，用一管取一管。
4. 质粒加太多或盐重