📖 实验教程

菌落PCR本应是最省心的筛选手段，可偏偏有时跑胶一看：阴性对照亮着，阳性对照却模糊；条带大小看着对，送去测序却全是重复序列或空载体。这种“假阳性”最闹心，浪费的是时间、试剂和信心。别急着换酶，也别抱怨...

摇瓶发酵看着简单——培养基、摇床、接种、收获，但一染菌就是整批报废。你做完了灭菌、超净台操作、封口膜也裹了三层，结果一夜之间培养基变混浊、pH暴跌、镜检全是杂菌。别急着怀疑人品，染菌的源头其实就那么几...

做厌氧发酵最怕什么？不是染菌，不是pH崩了，而是辛辛苦苦养了三天，集气袋里就瘪瘪一层底，测出来甲烷含量不到30%。你怀疑菌种退化，怀疑底物中毒，甚至想把发酵罐砸了重来——但先冷静，根据我在实验室摸爬滚...

诱导表达蛋白，最怕的不是没表达，而是“表达了一坨包涵体”——上清里干干净净，沉淀里全是你的目标蛋白。更气人的是，有时候连沉淀里都看不到条带。你调了温度、改了IPTG浓度、换了菌株，结果还是老样子。本文...

把珍贵的菌株从-80℃冰箱里取出来，划平板、接液体，结果第二天一看——什么都没长。这种“冰箱里明明有菌，却怎么也唤不醒”的挫败，几乎每个分子生物人都经历过。问题往往出在冻存环节、复苏手法、培养基状态或...

开箱一支抗体大几千，熬夜跑胶转膜一整天，最后压片一片空白——Western Blot无信号，几乎所有分子生物学人都经历过这种绝望。更崩溃的是，你根本不知道问题出在一抗、二抗、转膜还是显影，只能像无头苍...

辛辛苦苦提完蛋白，配胶、上样、转膜一气呵成，结果显出来却是“鬼脸条带”、“鼻涕拖尾”、或者干脆白板一片，有没有瞬间想连电泳槽一起扔出去的冲动？别急，90%的SDS-PAGE条带异常都不是玄学，而是有明...

你是不是也遇到过——电泳胶上明明该出的条带没出来，不该出的杂带倒糊成一片？或者双酶切做完，回收的片段大小怎么都对不上，重新做三次还是老样子？这锅八成要甩给“限制酶切不完全”和“星号活性”。本篇教程不拽...

是不是每次满怀期待地剥开凝胶，看到的却是弥散到亲妈都不认识的条带、笑成月牙的泳道，或者干脆空白得让你怀疑自己加了个寂寞？SDS-PAGE 作为蛋白实验的“童子功”，折腾人的功力一点不输高级仪器。今天这...

做过TA克隆、Gibson组装前的T4连接过渡，或者传统酶切连接的都知道——**连接这一步，往往卡得最莫名其妙**。明明载体切干净了、片段回收浓度也不低，转化后平板就是“白花花一片不长菌”或者“全蓝斑...

色氨酸2-单加氧酶（TMO）能够催化L-色氨酸转化为重要的植物生长调节剂吲哚-3-乙酰胺，但天然酶的热稳定性极差，严重制约其工业应用。传统酶工程改造常陷于规模庞大的实验筛选泥潭，而对TMO的稳定性设计...

面对日益严峻的气候变化，人工固碳途径的设计与优化成为合成生物学的研究热点。其中，乙醇酰辅酶A羧化酶（glycolyl-CoA carboxylase, GCC）是羟基丙酸/羟基丁酸循环等新型固碳通路的...