📖 实验教程

转染效率低，GFP稀稀拉拉，几乎每个分子生物人都遇到过。你调过DNA量、换过脂质体品牌，甚至怀疑过细胞在“闹脾气”，但问题可能藏在某个操作细节里。本文从新手最容易犯的低级错误开始，按转染前、中、后的流...

菌落PCR本应是最省心的筛选手段，可偏偏有时跑胶一看：阴性对照亮着，阳性对照却模糊；条带大小看着对，送去测序却全是重复序列或空载体。这种“假阳性”最闹心，浪费的是时间、试剂和信心。别急着换酶，也别抱怨...

体外转录（IVT）做mRNA，最怕加帽效率低或完全没有cap-0/cap-1结构。电泳条带忽大忽小、转染后翻译效率暴跌、qPCR检出率异常……问题往往藏在试剂浓度、反应顺序和温育时间这些细节里。本文按...

摇瓶发酵看着简单——培养基、摇床、接种、收获，但一染菌就是整批报废。你做完了灭菌、超净台操作、封口膜也裹了三层，结果一夜之间培养基变混浊、pH暴跌、镜检全是杂菌。别急着怀疑人品，染菌的源头其实就那么几...

做厌氧发酵最怕什么？不是染菌，不是pH崩了，而是辛辛苦苦养了三天，集气袋里就瘪瘪一层底，测出来甲烷含量不到30%。你怀疑菌种退化，怀疑底物中毒，甚至想把发酵罐砸了重来——但先冷静，根据我在实验室摸爬滚...

诱导表达蛋白，最怕的不是没表达，而是“表达了一坨包涵体”——上清里干干净净，沉淀里全是你的目标蛋白。更气人的是，有时候连沉淀里都看不到条带。你调了温度、改了IPTG浓度、换了菌株，结果还是老样子。本文...

把珍贵的菌株从-80℃冰箱里取出来，划平板、接液体，结果第二天一看——什么都没长。这种“冰箱里明明有菌，却怎么也唤不醒”的挫败，几乎每个分子生物人都经历过。问题往往出在冻存环节、复苏手法、培养基状态或...

做qPCR最抓狂的不是没结果，而是结果“看起来不对劲”——扩增曲线不是光滑的S型，熔解曲线冒出两个峰，阴性对照也跟着起峰。你换了新试剂、改了退火温度，问题依旧。其实大部分异常不是试剂玄学，而是流程里某...

养了一大批菌，加IPTG诱导了半天，破菌跑胶一看，目的条带空空如也。这种“颗粒无收”的感觉，做蛋白表达的人都懂。诱导失败原因很多，但90%都集中在几个环节：菌株和质粒、诱导条件、蛋白本身毒性、检测方法...

跑胶时marker异常，是最让人抓狂的事——条带忽明忽暗、大小对不上、边缘像毛刺，甚至整条泳道糊成一片。你怀疑是自己样品的问题，但marker本身就是“标尺”，它出问题，整个实验都失去参照。本文从低级...

做克隆时，蓝白斑筛选本该是“挑白色克隆就完事”的轻松活，可结果经常是——蓝斑不蓝、白斑不白、白斑里没插入片段，甚至空载体也长成白斑。你反复提质粒、酶切、测序，浪费两三天才发现问题出在筛选体系本身。本文...

转染做了、抗生素筛了、单克隆也挑了，送去测序却全是野生型——这种“敲了个寂寞”的感觉，做过CRISPR的人应该都懂。敲除效率低的原因很多，但一半以上出在sgRNA设计上。本文按实验流程，从最基础的低级...