📖 实验教程

菌落PCR本应是最省心的筛选手段，可偏偏有时跑胶一看：阴性对照亮着，阳性对照却模糊；条带大小看着对，送去测序却全是重复序列或空载体。这种“假阳性”最闹心，浪费的是时间、试剂和信心。别急着换酶，也别抱怨...

摇瓶发酵看着简单——培养基、摇床、接种、收获，但一染菌就是整批报废。你做完了灭菌、超净台操作、封口膜也裹了三层，结果一夜之间培养基变混浊、pH暴跌、镜检全是杂菌。别急着怀疑人品，染菌的源头其实就那么几...

做厌氧发酵最怕什么？不是染菌，不是pH崩了，而是辛辛苦苦养了三天，集气袋里就瘪瘪一层底，测出来甲烷含量不到30%。你怀疑菌种退化，怀疑底物中毒，甚至想把发酵罐砸了重来——但先冷静，根据我在实验室摸爬滚...

诱导表达蛋白，最怕的不是没表达，而是“表达了一坨包涵体”——上清里干干净净，沉淀里全是你的目标蛋白。更气人的是，有时候连沉淀里都看不到条带。你调了温度、改了IPTG浓度、换了菌株，结果还是老样子。本文...

把珍贵的菌株从-80℃冰箱里取出来，划平板、接液体，结果第二天一看——什么都没长。这种“冰箱里明明有菌，却怎么也唤不醒”的挫败，几乎每个分子生物人都经历过。问题往往出在冻存环节、复苏手法、培养基状态或...

做qPCR最抓狂的不是没结果，而是结果“看起来不对劲”——扩增曲线不是光滑的S型，熔解曲线冒出两个峰，阴性对照也跟着起峰。你换了新试剂、改了退火温度，问题依旧。其实大部分异常不是试剂玄学，而是流程里某...

养了一大批菌，加IPTG诱导了半天，破菌跑胶一看，目的条带空空如也。这种“颗粒无收”的感觉，做蛋白表达的人都懂。诱导失败原因很多，但90%都集中在几个环节：菌株和质粒、诱导条件、蛋白本身毒性、检测方法...

做克隆时，蓝白斑筛选本该是“挑白色克隆就完事”的轻松活，可结果经常是——蓝斑不蓝、白斑不白、白斑里没插入片段，甚至空载体也长成白斑。你反复提质粒、酶切、测序，浪费两三天才发现问题出在筛选体系本身。本文...

跑胶时marker异常，是最让人抓狂的事——条带忽明忽暗、大小对不上、边缘像毛刺，甚至整条泳道糊成一片。你怀疑是自己样品的问题，但marker本身就是“标尺”，它出问题，整个实验都失去参照。本文从低级...

开箱一支抗体大几千，熬夜跑胶转膜一整天，最后压片一片空白——Western Blot无信号，几乎所有分子生物学人都经历过这种绝望。更崩溃的是，你根本不知道问题出在一抗、二抗、转膜还是显影，只能像无头苍...

辛辛苦苦提完蛋白，配胶、上样、转膜一气呵成，结果显出来却是“鬼脸条带”、“鼻涕拖尾”、或者干脆白板一片，有没有瞬间想连电泳槽一起扔出去的冲动？别急，90%的SDS-PAGE条带异常都不是玄学，而是有明...

你是不是也遇到过——电泳胶上明明该出的条带没出来，不该出的杂带倒糊成一片？或者双酶切做完，回收的片段大小怎么都对不上，重新做三次还是老样子？这锅八成要甩给“限制酶切不完全”和“星号活性”。本篇教程不拽...