来源：蛋白纯化电导升高盐析、发酵pH骤降污染排查、细胞培养黑点颗粒支原体、核酸电泳条带弱上样量、质谱峰面积低进样针堵、克隆转化子少感受态效率、蛋白表达量低宿主菌株、发酵菌体自溶发酵时长（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
诱导完跑SDS-PAGE，目标条带浅得像没长出来，或者全堆在沉淀里——这大概是蛋白表达最常踩的坑。别急着怀疑自己手气差，大概率是某个环节的参数没对。这篇把从菌株选择、载体序列到诱导温度、培养基的整条链路拆开，7步排查路径，每一步都给你判断依据、解决动作和验证方法。照着做，绝大多数“表达量低”能定位到具体原因。
第一步：快速排查低级错误
1. 抗生素加错了或者忘了加。氨苄青霉素用100 μg/mL，卡那霉素50 μg/mL，氨苄平板最好现配现用，超过一周效价掉得厉害。解决：从甘油管重新划板，挑单克隆过夜。
2. 诱导时菌太稀或太浓。OD600不到0.4就加IPTG，菌还没长起来；超过1.0再加，代谢已经往次级产物走了。解决：OD600到0.6-0.8再加诱导剂。
3. IPTG浓度和诱导时间不对。常用0.1-1 mM，37°C诱导3-4小时或16°C过夜。有人直接上1 mM还只诱导1小时，条带当然弱。解决：先试0.5 mM IPTG、37°C 4小时。
4. 菌株标签贴错了。DH5α是克隆菌，没有T7 RNA聚合酶，用它表达pET系列质粒基本白搭。解决：表达用BL21(DE3)，从甘油管重新划线确认。
第二步：分维度系统排查
按实验流程走，从序列到培养，每个模块给判断和动作。
1. 载体序列与密码子
现象：小试诱导后SDS-PAGE目标位置几乎没条带，Western也弱。
原理：大肠杆菌里AGG/AGA等稀有密码子多了，翻译会卡住；mRNA 5'端二级结构太强，核糖体结合