PCR扩增非特异条带退火温度梯度

来源：PCR扩增非特异条带退火温度梯度（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space

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PCR跑出非特异条带，先别急着换引物。你看到的弥散、杂带或拖尾，大概率是退火温度、Mg2+浓度、模板量或引物本身出了问题。这篇教程按“先排低级错、再走系统流程、最后看疑难”的顺序，把退火温度梯度怎么设、怎么读、怎么回退到单管验证一次讲清，覆盖20 μL体系、55-65°C梯度、30-35个循环这些常用参数。直接照着做，能少废几板胶。

第一步：快速排查低级错误

这四步五分钟能过一遍，别嫌笨。

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