蛋白二硫键错配氧化还原调控

来源:蛋白二硫键错配氧化还原调控(DNA Lab Space 实验教程)| 编译:DNA Lab Space

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重组蛋白跑非还原胶,多条带、拖尾、活性低,一上还原胶又变单带?大概率不是标签坏了,是二硫键配错了。别急着换载体。二硫键成对还是成“乱麻”,跟宿主氧化还原环境、诱导温度、裂解通气、复性缓冲液、纯化储存全链路有关。下面按“快速排低级错—分流程系统查—进阶疑难”走一遍,给出能直接上手的具体参数和验证动作。

第一步:快速排查低级错误

教程配图2:蛋白二硫键错配氧化还原调控 排查流程示意
▲ 教程配图2:蛋白二硫键错配氧化还原调控 排查流程示意
教程配图3:蛋白二硫键错配氧化还原调控 排查流程示意
▲ 教程配图3:蛋白二硫键错配氧化还原调控 排查流程示意

1. 非还原胶样品里还加了DTT。现象:还原/非还原一个样。解决:非还原

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