来源：色谱柱柱压升高CIP清洗（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
柱压突然从80 bar爬到120 bar，别急着拆柱子。柱压升高大概率是系统堵、盐析出、样品脏或柱头污染。本文按“低级错误—系统排查—CIP清洗—进阶疑难”给动作链，覆盖从0.22 µm过滤到0.1 M NaOH清洗的具体参数。
第一步：快速排查低级错误
1. 柱前过滤器堵了。拆下在线过滤器，用70%异丙醇超声10分钟，或直接换0.5 µm frit；装回后纯水1.0 mL/min看压力是否降到3 bar以内。
2. 流动相没脱气或盐析出。缓冲液用0.22 µm滤膜过滤，超声10分钟；含20 mM磷酸盐+0.15 M NaCl的流动相别在4°C久放，25°C水浴复溶后再上机。
3. 样品没离心。12000×g、4°C离心10分钟，上清过0.22 µm；粘性大的裂解液先加DNase I至5 U/mL，室温10分钟。
4. 柱子接反或接头漏。按柱体箭头接，PEEK接头手紧后再拧1/4圈；漏液会带入气泡，压力会抖，先排气泡再跑。
第二步：分维度系统排查
1. 系统压力还是柱压，先隔离。
现象：接柱后压力高，换零死体积接头仍高。原理：泵头、管路、进样阀堵塞会伪装成柱压。解决：拆柱，用零死体积接头，纯水1.0 mL/min跑5分钟；系统压>3 bar就清洗泵头、换在线过滤器。验证：系统压<2 bar后再接柱，柱压仍高才是柱子问题。
2. 看压力随流速的变化。
现象：0.2 mL/min就高压，或升到1.0 mL/min才飙。原理：低压高多为入口frit堵，高压才高多为床层压缩或流动相粘度大。解决：从0.2 mL/min起，每5分钟升0.2 mL/min；低压就高，拆柱头换frit；高压才高，降流速至0.3 mL/min并查柱床。验证：压力-流速曲线应近线性，非线性说明有堵塞或塌陷。
3. 流动相盐浓度和温度。
现象：跑2小时后压力缓慢上升，停机过夜更高。原理：磷酸盐在低温、高盐下析出，堵柱头。解决：流动相0.22 µm过滤，25°C水浴；跑前纯水5 CV，跑后纯水10 CV冲洗。验证：换新配缓冲液，若压力降10-20 bar，就是盐析。
4. 样品聚集、DNA和脂类。
现象：进样后压力阶梯式上升，峰变宽。原理：蛋白聚集体、DNA粘在筛板上。解决：样品12000×g离心10分钟，0.22 µm过滤；DNA多时加DNase I 5 U/mL、25°C 15分钟；脂类用0.1% CHAPS助溶后再离心。验证：进一针空白，压力不继续升说明样品处理有效。
5. 柱头筛板和frit污染。
现象：柱头可见棕黄色带，压力高且峰拖尾。原理：填料表面积累变性蛋白。解决：先查柱子耐碱范围；允许时用0.1 M NaOH、0.3 mL/min、30分钟，再纯水10 CV；不建议盲目反冲，除非厂家明确允许。验证：清洗后压力降到基线+10%以内，峰对称因子0.8-1.2。
6. CIP清洗按污垢选试剂。
现象：常规水冲无效，压力反复。原理：不同污垢需不同CIP试剂。解决：蛋白类用0.1 M NaOH 10 CV、0.3 mL/min、30-60分钟；疏水脂类用70%异丙醇5 CV、0.2 mL/min；强聚集体用6 M盐酸胍5 CV、0.2 mL/min、2小时；每2 CV记录压力，超基线10%立即停。验证：纯水10 CV冲至pH中性，20%乙醇保存；次日复测压力不反弹。
第三步：进阶疑难问题
1. CIP后压力反弹。 现象：清洗当天正常，第二天又升。原理：清洗剂与缓冲盐不兼容，二次析出。解决：CIP后必须纯水10 CV，再用20%乙醇保存；若反弹，换0.1 M NaOH 15分钟+纯水10 CV。验证