来源：蛋白凝胶电泳条带歪斜胶体聚合均匀度（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
跑SDS-PAGE，最怕的不是没条带，是条带歪着走。左边高右边低，中间鼓成笑脸，胶面还坑坑洼洼。重复三次，三次不一样。别急着怀疑样品。90%的“歪胶”问题出在胶本身没聚匀。这篇从配胶试剂、灌胶操作、聚合环境一路查到电泳条件，参数给死，照着排就行。
第一步：快速排查低级错误
先看这四个地方。新手踩坑率最高。
1. 玻璃板没洗干净：板上有残胶、指纹或油膜，胶液爬不匀。解决：拆板后用70%乙醇擦两遍，自然晾干，别拿自来水冲完直接用。
2. APS加少了或过期了：10%过硫酸铵在4°C放超过一周就废了。解决：现配现用，每10 mL胶液加100 μL 10% APS，-20°C分装可存1个月。
3. 灌胶时有气泡没敲出来：气泡卡在胶里，聚合后就是个洞，周围胶面必然歪。解决：灌完沿玻璃板轻敲三下，立即封液。
4. 电泳缓冲液用了第三遍：离子耗尽，电流乱跑。解决：Tris-Glycine缓冲液最多用2次，pH必须8.3。
第二步：分维度系统排查
胶歪不是单一原因。按流程往下走，一段一段排。
模块一：配胶试剂（胶软、不凝或凝得不匀）
1. APS/TEMED比例失调。 现象：胶液30分钟还流动，或者凝了但一碰就碎。原理：APS供自由基、TEMED催化，两者缺一不可。解决：10 mL分离胶加10% APS 100 μL + TEMED 10 μL，20-25°C静置30分钟。验证：配1 mL小样计时，正常15-25分钟凝固。
2. 丙烯酰胺储存液变质。 现象：条带弥散、胶发软、蛋白跑不进去。原理：Acr-Bis见光或高温水解成丙烯酸，聚合链变短。解决：30% Acr-Bis（29:1）4°C避光，开封后30天内用完，用前0.45 μm滤膜过滤。验证：新配胶切一小块，按压有弹性不粘手。
3. 缓冲液pH漂了。 现象：浓缩胶和分离胶交界模糊，条带整体倾斜。解决：1.5 M Tris-HCl pH 8.8和0.5 M Tris-HCl pH 6.8，配完用pH计复核，4°C存放不超过2个月。
模块二：灌胶与聚合（胶面不平、出现分界线）
4. 胶液没平衡到室温。 现象：冬天配胶，胶面出现“波纹”或斜的分界线。原理：低温下聚合放热慢，胶液在凝固前发生对流。解决：胶液从4°C取出，室温放20分钟再灌；聚合环境保持20-25°C，冬天放25°C水浴20分钟。验证：观察胶面是否水平，歪了直接重灌。
5. 封胶液加得太猛。 现象：胶面上沿被冲出一个坑，或者整面倾斜。解决：灌完分离胶后，用1 mL移液器沿玻璃板壁缓慢加0.5-1 mL异丙醇或ddH₂O，别垂直滴。验证：封液层和胶面之间应是一条直线。
6. APS和TEMED没混匀。 现象：胶里出现絮状白丝或局部硬块，条带经过时歪折。解决：加APS/TEMED后颠倒混匀5-6次，别涡旋，涡旋起泡。验证：对着光看，胶液应均匀透明无丝状物。
模块三：电泳阶段（条带歪、笑脸带）
7. 上样量太大或盐浓度太高。 现象：条带呈“笑脸”形，中间跑得快两边慢，或者条带拖尾。原理：高盐改变局部电导率，样品孔内电流不均。解决：每孔上样≤20 μL，样品盐浓度控制在<100 mM，超了用超滤管换液。验证：同一蛋白稀释两倍上样，看带形是否改善。
8. 电压太高、散热不均。 现象：条带整体歪斜，胶两边发热明显。解决：浓缩胶80 V跑30分钟，分离胶120 V跑60