来源：蛋白稳定性差降解片段添加蛋白酶抑制剂（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
蛋白电泳总在目标条带下面拖一串小条带，纯化活性还低，这种重复性最磨人。别急着换载体。问题大概率出在裂解到保存这一段，尤其是蛋白酶抑制剂加没加对。本文按实验流程拆开讲：先排低级错误，再分维度查裂解、抑制剂、温度、纯化、上样，最后处理截短表达和抑制剂冲突。你把动作链走一遍，降解片段通常能压下去。
第一步：快速排查低级错误
- 裂解液没冰预冷，室温放半小时才用。解决：所有缓冲液4°C预冷，裂解全程冰上，离心机预冷到4°C。
- 抑制剂cocktail加进已经裂解完的样品里。解决：裂解液配好先加1×cocktail和1 mM PMSF，混匀后再上细胞或菌体。
- PMSF用旧水配、pH不对，或者母液反复冻融。解决：PMSF用无水乙醇配200 mM母液，-20°C分装，工作浓度1 mM，现加现用，4°C半衰期约1 h。
- 样品反复冻