来源：DNA胶回收效率低洗脱体积与温度（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
跑完胶，条带挺亮。回收完一测，浓度却想摔枪。胶回收效率低，十有八九卡在洗脱体积和温度上。别急着怀疑试剂盒。这篇把切胶、溶胶、上柱、洗涤、洗脱全流程拆开，重点讲洗脱体积怎么定、洗脱液要不要预热、什么时候做二次洗脱，给你能直接照做的参数和验证方法。
第一步：快速排查低级错误
先看4个新手最常犯的错。中一个，后面全白忙。
- 胶块切太大，溶胶液没没过胶块。100 mg胶至少加300 µL溶胶液，55-60°C孵育10 min，每2-3 min颠倒混匀一次。
- 洗脱体积贴着柱膜死体积。少于20 µL很吃亏，膜死体积约15-20 µL，实际回收可能只剩5-10 µL。常规用30-50 µL。
- 洗脱液悬空滴到管壁，没接触柱膜中央。加液直接对准膜中央，静置2 min再离心，12000-14000 rpm离心1 min。
- 洗脱液pH偏低，或者用pH 6.0的无核酸酶水硬洗。DNA带负电，低pH降低洗脱效率。用