来源：FFPE DNA提取片段化修复（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
FFPE样本做DNA，最怕三件事：提不出来、提出来全是短片段、修复后还是扩增失败。你明明按试剂盒走了，qPCR却到35个循环才起跳，琼脂糖胶上只有一团<500 bp的弥散。别急着换试剂盒。问题大概率藏在脱蜡、消化、纯化、修复这四段里。下面按流程拆开，给你能直接照做的排查动作。
第一步：快速排查低级错误
1. 切片太厚或脱蜡不净：组织外还裹着石蜡，蛋白酶K根本进不去。
解决：切片控制在5–10 μm，二甲苯1 mL室温洗10分钟×2次，无水乙醇1 mL洗5分钟×2次，37°C开盖10分钟蒸干。
2. 蛋白酶K失效或加量不足：裂解液过夜仍黏稠，说明消化没完成。
解决：用新鲜配制的蛋白酶K，终