来源：血浆游离DNA得率低采血管选择（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
抽完血，提cfDNA，Qubit读数0.2 ng/µL甚至无值？别急着怪试剂盒。血浆游离DNA得率低，常常在采血管和采血后那几小时就埋雷了。本文按采血管选择、采血顺序、混匀、运输、离心、血浆分装、提取来排查，给你能直接照做的参数和验证动作。覆盖EDTA、Streck BCT、枸橼酸、肝素等常见管，也讲溶血、白细胞裂解和基因组DNA污染怎么区分。
第一步：快速排查低级错误
- 用错采血管：做cfDNA却拿普通促凝管或血清管。血清管凝血时白细胞裂解，gDNA飙升，cfDNA被稀释。解决：换K2 EDTA管或专用cfDNA保存管，如Streck BCT。
- 采血量不足：10 mL管只抽3 mL，抗凝剂比例失衡，血浆量少还容易凝。解决：真空管抽至刻度线，至少8-10 mL。
- 采血后没混匀：EDTA管抽完直立不动，管壁抗凝剂没溶开。解决：采血后立即轻柔颠倒8-10次，别剧烈振荡。
- 室温放太久：EDTA管室温搁4小时以上才离心。解决：2小时内离心；要运输过夜，直接上Streck BCT。
第二步：分维度系统排查
1. 采血管类型与保存能力
现象：EDTA管得率从1 ng/µL掉到0.1 ng/µL，Bioanalyzer出现>1 kb gDNA峰。原理：EDTA只抗凝，不抑制白细胞凋亡。室温>4 h，白细胞裂解释放gDNA，提取柱饱和，短片段cfDNA回收下降。解决：若2 h内离心，K2 EDTA管够用；若需运输或过夜，换Streck cfDNA BCT，室温15-25°C保存，别冷冻。验证：同一人抽两管，一管EDTA立即离心，一管BCT室温放72 h再离心。Qubit HS测浓度，Bioanalyzer看170 bp cfDNA峰和>1 kb gDNA峰。BCT管gDNA峰低于5%，说明管选对了。
2. 采血顺序与抗凝剂比例
现象：血浆发红，或有纤维蛋白丝，提取后A260/280<1.6。原理：EDTA不足，钙离子残留，凝血级联启动；溶血释放血红素抑制PCR。解决：多管采血顺序用血培养→凝血→血清→肝素→EDTA→cfDNA专用管。EDTA管抽满至10 mL，抗凝剂终浓度约1.5-2 mg/mL。验证：离心后看血浆颜色，淡黄透明合格；红色则溶血，弃用。
3. 混匀与运输
现象：管底有胶冻状凝块，血浆得量少。原理：没混匀，抗凝剂局部浓度高，血液局部凝集。解决：采血后立即颠倒8-10次，5秒内完成；运输用15-25°C，别放冰袋，别剧烈摇晃。BCT管可室温放3天；EDTA管必须2 h内到实验室。