来源：酵母表面展示效率低诱导条件（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
你的酵母表面展示是不是又没信号？流式图上主群右移一点点，甚至和空载体分不开。别急着怀疑质粒，八成是诱导环节掉了链子。这篇教程从低级错误到进阶坑，按实验流程拆解Aga1p/Aga2p系统的展示效率问题，给你能直接上手的参数和验证方法。
第一步：快速排查低级错误
先看三个新手最容易翻车的点。
1. 诱导时还有葡萄糖。GAL1启动子被葡萄糖压得死死的，哪怕残存0.1%都够呛。解决：诱导前用10 mL无菌PBS洗两次，3000g离心5分钟，彻底换液。
2. 半乳糖浓度不够或者被高温灭活。有人用1%还高压灭菌，颜色都变黄了。解决：配2%半乳糖，0.22 μm滤膜过滤，别高压。
3. 诱导起始OD600太高。OD冲到3-5才加半乳糖，营养一耗光，展示量直接腰斩。解决：稀释到OD600 0.5-1.0再诱导。
第二步：分维度系统排查
按流程走，从种子到染色，一个模块一个模块过。
1. 菌株和质粒状态
现象：同一批质粒，昨天有信号今天没有。
原理：Aga1p是锚定蛋白，Aga2p是融合展示蛋白。Aga1p表达不足，Aga2p就没地方挂。
解决：确认Aga1p是基因组整合还是质粒表达。如果是质粒，用URA3或LEU2标记，SD-URA或SD-LEU培养基维持选择压。别在YPD里养超过2代，质粒丢失率能到30%。
验证：挑单克隆，做菌