来源：蛋白电泳条带拖尾胶浓度梯度（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
跑SDS-PAGE最烦看到条带往下拖、边缘翘、整孔糊成一片。拖尾不一定是样品坏了。胶浓度梯度、灌胶混匀、盐浓度、电压发热都能背锅。下面按制胶到电泳的顺序，给你判断动作和常用参数，把“拖尾”定位到具体一步。
第一步：快速排查低级错误
1. 胶没混匀就灌。现象：整板条带斜拖或局部模糊。解决：加APS/TEMED后轻柔颠倒5-8次，别起泡，立即灌。
2. APS/TEMED失活。现象：30-60分钟不凝，或胶软塌塌。解决：10% APS现配，10 mL胶加100 µL APS、5-10 µL TEMED，室温聚合45-60分钟。
3. 样品盐太高或上样量太大。现象：整孔下拖，边缘发亮。解决：5× loading稀释，盐尽量低于50 mM，每孔上10-30 µg，总蛋白别超40 µg。
4. 拔梳子太早或孔没冲净。现象：孔底碎胶，条带歪斜。解决：聚合后再等20分钟，拔梳子后用注射器冲孔2-3次。
第二步：分维度系统排查
A. 样品制备
1. 还原不彻底、蛋白聚集。现象：高分子量条带拖尾，泳道顶部有团块。原理：二硫键没断，SDS结合不均。解决：5× loading含100 mM DTT或5% β-ME，95°C 5-10分钟；难溶蛋白可37°C 30分钟，或加8 M尿素、1% SDS后再煮沸。上样前12000 g离心5分钟取上清。验证：同一样品跑非还原胶对比，拖尾减轻说明还原到位。
2. 盐、脂、核酸污染。现象：所有条带下拖，染料前沿歪。原理：盐改变电导，核酸黏度大。解决：样品盐低于50 mM；核酸用benzonase 25°C处理10分钟或短时超声；脂质用1% SDS加95°C 5分钟。验证：稀释5倍上样，拖尾变轻就是污染。
B. 制胶与胶浓度梯度
3. 分离胶浓度不匹配。现象：目标条带拖尾，胶底部挤成窄带。原理：孔径和蛋白分子量不匹配，小蛋白在低浓度胶里扩散。解决：10-40 kDa用15%或4-20%梯度胶；40-100 kDa用10-12%；大于100 kDa用6-8%。验证：同一品