来源：电转染效率低脉冲参数优化（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
电转后24小时一看荧光，阳性率不到10%，死细胞却一大片？别急着换试剂。电转染的变量就藏在电场、缓冲液和细胞状态里。这篇按实验流程拆开讲：先扫低级错误，再按细胞、缓冲液、脉冲、后处理四个模块排查，再补三个进阶坑。每个原因都给现象、判断动作和解决参数，照着做能少走两轮弯路。
第一步：快速排查低级错误
- 杯子间隙和程序不匹配：0.4 cm 杯用了 0.2 cm 程序，场强直接翻倍。解决：看电极间距，按 V/cm 折算，0.4 cm 杯 250 V 对应 0.2 cm 杯约 125 V。
- 缓冲液带盐：PBS 或培养基没换干净，脉冲一响就打火。解决：用无钙镁 PBS 洗两次，最后用 100 µL 电转缓冲液重悬