来源：蛋白结晶析出无晶体添加剂筛选（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
坐滴板摆到第5天，液滴还是白白一团。显微镜下连个晶亮的边都没有，筛完3块96孔板，小半个月只换来一板沉淀。这种情况新手特别容易卡住，也最容易乱改配方。本文只讲“出沉淀、不出晶体”这一种情况，从样品状态、沉淀剂体系、添加剂筛选策略、温度扩散到接种成核，把怎么判断、怎么验证、怎么解决一次说清，参数都给到你能直接照着做的程度。
第一步：先别急着换配方，4个低级错误排查
1. 蛋白进孔前没离心。 取100 μL样品，12000 g、4°C离心10分钟，只取上清，浓度按A280重测，别信标签上写的10 mg/mL。
2. 母液配错或放太久。 PEG 3350配40%（w/v）储液，0.22 μm滤膜过滤，配完测折光率，和标准曲线偏差超过0.002就重配。
3. 蛋白浓度一上来就超标。 坐滴1 μL蛋白+1 μL储液体系里，蛋白终浓度压到5-10 mg/mL，超过15 mg/mL大概率直接沉。
4. 板子没封严。 96孔坐滴板透明胶带四边压紧，20°C静置，24小时储液室蒸发超过10%就整板重做。
第二步：按实验流程分环节系统排查
环节1：样品本身行不行
现象：液滴均匀浑浊、絮状或细沙状，偏振光下没有亮点，颗粒没有规则边界。
原理：聚集态蛋白表面不均匀，成核位点被非特异性接触占满，只能走沉淀这条路，添加剂加再多也救