来源：琼脂糖凝胶条带模糊电压（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
跑完胶，条带像被橡皮擦蹭过，边缘糊成一片。你第一反应调电压，有时对，有时越调越糟。模糊可能来自制胶、上样、缓冲液、电压、温度、染色任何一环。这篇按“低级错误→流程模块→进阶疑难”走一遍，给你具体电压、时间、浓度和验证动作。别急着扔胶，先看这几个点。
第一步：快速排查低级错误
- 电压直接拉到 220 V？现象是胶发烫、条带 smiling。解决：迷你胶 80–100 V，大胶按 1–5 V/cm 电极间距算，跑 30–60 min。
- 缓冲液重复用超过 3 次？离子强度掉下来，条带拖尾。解决：换新鲜 1×TAE 或 0.5×TBE，液面高过胶面 2–3 mm。
- 胶没凝固就拔梳子？孔底破了，条带歪。解决：室温凝固 30 min，或 4°C 15 min，拔梳子前把胶浸没在缓冲液里。
- 上样量太大、盐太高？孔里亮团，泳道发白。解决：50–100 ng/孔，6× loading dye 按 1:5 加，总上样体积不超过孔体积的 80%。
第二步：分维度系统排查
1. 制胶：浓度和凝固决定分辨率
现象：小片段挤成一团，大片段拖尾。原理：琼脂糖浓度越高，孔径越小，小 DNA 分得开，大 DNA 反而跑不动。解决步骤：0.8% 跑 >5 kb；1% 跑 0.5–7 kb；1.5–2% 跑 <500 bp。称 1 g 琼脂糖加 100 mL 1×TAE，微波沸腾 3 次，每次摇匀，冷到 60°C 加 0.5 µg/mL EtBr，倒胶厚度 5–7 mm。验证：跑 100 bp ladder，看相邻带是否分开。分不开就换浓度。
2. 上样：样品盐和蛋白残留
现象：条带晕开，泳道整体发白。原理：高盐让导电不均，蛋白结合 DNA 改变迁移。解决步骤：PCR 产物直接上样别超过 5 µL；质粒用 1× loading dye 稀释；盐太高做乙醇沉淀：0.1 倍体积 3 M NaOAc pH 5.2，加 2.5 倍体积无水乙醇，-20°C 30 min，12,000×g 4°C 10 min，70% 乙醇洗一次，溶 10 µL TE。验证：同一管做 1:5 稀释，模糊减轻就是上样问题。
3. 缓冲液：新鲜度和液面
现象：条带整体慢、拖尾、溴酚蓝前沿弯。原理：缓冲液 pH 和离子强度决定 DNA 电荷与电流。解决步骤：1×TAE 用 0.5–1×，TBE 用 0.5×；每次配 1 L，重复使用不超过 3 次。液面没过胶面 2–3 mm。验证：空胶跑 5 min，看溴酚蓝前沿是否平直；弯就换缓冲液。
4. 电压：高电压是模糊常客
现象：带变宽、发热、边缘翘。原理：电压过高，焦耳热让胶温升到 50°C 以上，DNA 扩散加剧，迁移率不再线性。解决步骤：迷你胶 80–100 V，跑 30–45 min；要分辨近带，降到 50–70 V，延到 60–90 min。大胶按 1–5 V/cm 电极间距，例如 20 cm 槽用 20–100 V。验证：跑前摸槽壁，微温可以，烫手就降电压或加冰袋。
5. 染色与成像：别把模糊赖给电压
现象：条带边缘毛、背景高。原理：EtBr 染色不均、UV 过曝会放大模糊。解决步骤：胶内 EtBr 0.5 µg/mL；后染用 1×TAE 加 0.5 µg/mL EtBr 染 20 min，脱