📖 实验教程

辛辛苦苦提的RNA，跑完反转录，结果cDNA浓度低到怀疑人生。下游qPCR没CT值，建库直接失败，实验进度卡死。别急着怀疑人生，90%的“产量低”其实都是可以快速定位和挽救的。这篇教程从最基础的加样错...

无细胞蛋白合成（CFPS）是个好技术，但也是最容易让人“血压飙升”的实验之一——同一管提取物，昨天做出来产量2.1 mg/mL，今天变成0.3 mg/mL，换个批次又变成1.8 mg/mL。你以为是自...

做原核表达纯化，最头疼的不是包涵体溶不出来，而是洗涤时“越洗越浑”——离心后沉淀不紧实、上清黏稠、SDS-PAGE杂带一大堆。你以为是裂解不彻底，其实是膜碎片在捣乱。这篇教程专门针对包涵体洗涤去膜碎片...

做克隆实验最怕什么？切胶回收只有对照的一半，跑完胶条带若隐若现；或者测OD260/280比值勉强到1.8，送去测序却永远是"信号微弱"。胶回收这步看似简单，但涉及溶胶pH、盐离子浓度、温度、离心速率四...

做分子克隆最怕什么？不是PCR没条带，而是胶回收后DNA浓度明明测出来有50 ng/μL，酶切37℃孵育了3小时，跑胶一看——还是那条粗亮的片段，纹丝不动。或者更糟，切出来一堆杂带，目的条带反而没了。...

做TA克隆最憋屈的事是什么？菌落PCR有条带，条带大小也对，送去测序回来一看——插入片段是反的，或者一个质粒里连了好几个拷贝。更气人的是，你换了载体、换了感受态，还是偶发出现。别急着怀疑人生，方向错误...

冻干菌株死得悄无声息，一批十几万的菌粉活菌数掉到千分之一，复苏平板上一片空白——这种场景，做过冻干的同学都懂。你以为冻干就是“冻住+抽真空”那么简单，但实际影响存活率的变量，从菌液浓度到出箱温度，每一...

转染实验做了三次，荧光图还是稀稀拉拉几个亮点，细胞倒是死得挺整齐？别急着怪细胞状态或者顺手换一管新脂质体。脂质体转染效率低，80%的坑其实都埋在你忽略的细节里。这篇教程从“低级错误”到“进阶疑难”帮你...

做CRISPR筛选最怕什么？不是细胞死了，不是测序深度不够，而是你辛辛苦苦转染完、提完基因组，一看覆盖度——300倍？500倍？该有的sgRNA少了一半。别人发文章文库覆盖度动辄1000×，你连300...

做分泌表达最气人的是什么？目标蛋白明明在细胞内一堆，培养基里却少得可怜；换了文献里推荐的热门信号肽，产量不升反降；甚至信号肽没切除、蛋白降解成碎片……这些坑我全踩过。今天这篇教程不聊虚的，直接按“从低...

做纯化的同行都懂，填料用久了总要再生。但最让人窝火的就是——明明按 SOP 再生了，结果柱效不仅没恢复，反而比再生前还差，HETP 疯狂飙高，峰形拖尾严重。这期教程就专门来撕开这个“再生后遗症”的锅，...

做杂交瘤实验，最怕的不是没结果，而是费尽心思融合、筛选，最后拿到一堆不分泌抗体或者分泌了却失活的克隆。细胞不生长、阳性率低、抗体特异性差，每一个坑都让人头疼。更麻烦的是，这些问题往往不是单一原因造成的...