📖 实验教程

做纯化最窝火的时刻不是跑不出蛋白，而是柱子用了几次、再生完之后，柱效肉眼可见地崩了：峰变宽、保留时间漂移、压力升高、分辨率下降。你甚至开始怀疑是不是填料报废了。别急着扔柱子，80%的“再生后柱效下降”...

CRISPR文库筛选是功能基因组学的大杀器，但很多人卡在第一步——文库构建。明明质粒浓度测出来挺高，送测序一看，覆盖度只有设计值的30%，甚至更惨。这意味着你的筛选结果是偏倚的，阳性基因可能漏掉，阴性...

做重组蛋白纯化，最怕看到SDS-PAGE上那条“朦胧的双带”或者质谱里相差几百道尔顿的杂峰——N端不均一。你辛苦诱导、破菌、纯化，最后却因为N端多了几个残基或少了几个残基，导致活性实验全部作废。这问题...

做过克隆的兄弟姊妹们，肯定都有过这种经历：感受态细胞刚买来或者刚制备好时，转化效率高得感人，随便几纳克质粒就能长出密密麻麻的克隆。但只要你把它从-80℃拿出来，用完又放回去，或者化了冻又冻上，下一次转...

做酵母双杂交最崩溃的瞬间，不是筛不到阳性克隆，而是筛出一堆假阳性——转进去的空载体和诱饵蛋白也能激活报告基因，换一批酵母还是亮蓝，Western blot 明明没条带但平板照样长菌。假阳性不仅浪费几周...

做无细胞表达最崩溃的瞬间，不是条带没有，而是条带若有若无——目的蛋白产量低到Western blot曝光3分钟才勉强见影，而你连RNase污染还是能量体系崩了都分不清。别慌，这套排查逻辑把“活性低”拆...

做冷冻干燥（冻干）保存菌株，本该是“一劳永逸”的事，结果开安瓿瓶一复苏，平板上一片空白或者只有零星几个菌落，前期菌种制备、冻干保护剂、冻干曲线全白费，实验进度直接卡死。更头疼的是，这种失败往往不是单一...

做灵芝液体发酵，辛辛苦苦摇瓶十几天，最后醇沉一看——沉淀少得可怜，感觉像做了个寂寞。更憋屈的是，菌球长得挺不错，糖产量却迟迟上不去。这种情况在实验室里太常见了，抛开菌株本身产糖能力的问题，操作流程里藏...

做PHA（聚羟基脂肪酸酯）的实验，最怕的就是摇瓶里菌体长得挺好，一测PHA含量却低得可怜。培养基没少配，诱导剂按时加，葡萄糖耗得也不慢，可最终离心收菌那点量，连做提取都不够。更头疼的是，问题往往不是单...

做亲和层析最烦什么？不是没挂上柱，而是洗脱峰拖尾——明明目的蛋白该出来了，峰却像拖着一条“长尾巴”，收峰时要么浓度稀得像水，要么混进杂蛋白，搞得后续浓缩、检测全得返工。你调了缓冲液、改了流速，尾巴还在...

做类胡萝卜素工程菌，最怕的就是菌体长了一大堆，颜色却淡得像“兑了水”的胡萝卜汁。挑转化子的时候看着一片苍白，摇瓶发酵更是让人心凉——工程菌颜色浅，不仅是“不好看”，更直接说明代谢通量没打通、产物产量不...

做慢病毒实验最怕什么？不是转染效率低，不是细胞污染，而是辛辛苦苦包装了72小时，收毒后一测滴度只有10^5 TU/mL，感染目标细胞荧光稀稀拉拉，Western blot条带淡到怀疑人生。滴度低不仅浪...