📖 实验教程

做放线菌次级代谢产物萃取，最让人崩溃的不是没产物，而是萃取后压根不分层：上面是 emulsion，下面是“牛奶”，中间还飘着一层不知道什么东西。你晃了分液漏斗，等了半小时，界面还是模糊一片，产物跟菌渣...

甘油补料速率没调好，轻则比生长速率掉一半，重则乙酸大量积累、目标蛋白表达直接崩盘。很多同学遇到OD600涨不上去或者产物产量忽高忽低，第一反应是调培养基配方，其实问题往往出在补料速率这个“动态参数”上...

拿到一批病毒上清，转染细胞效率看着不错，可一测滴度只有10^5 TU/mL，目标可是10^8——这种落差是不是很熟悉？包装滴度低，往往不是某一个环节“崩了”，而是多个小问题叠加的结果。别急着换试剂盒，...

做细菌总蛋白提取，最崩溃的瞬间不是没提出来，而是SDS-PAGE跑完，本该清晰的条带变成一道“涂抹”或“梯子”，连内参都认不出亲妈。降解的蛋白不仅浪费几天功夫，还让下游Western blot、Co-...

做无细胞蛋白表达，最怕的不是模板设计，而是镁离子浓度。高了，沉淀像雪花；低了，产量直接归零。更气人的是，同样的浓度在别人体系里好好的，换到你的体系就罢工。别急着换试剂，镁离子优化这件事，90%的问题都...

做基因合成片段PCR，最怕碰到GC含量超过65%的模板。条带若隐若现、引物二聚体糊成一片、甚至干脆什么都不出——你以为是酶的问题，换了三种高保真酶还是老样子。别急，这通常不是酶的锅，而是你的反应体系和...

做外膜蛋白的兄弟们，你们是不是也经历过：诱导后菌液OD600一路狂跌、SDS-PAGE目标条带消失、连包涵体都捞不到几毫克？外膜蛋白带着脂多糖和β-桶结构往细胞膜里插，每一步都在跟宿主“玩命”。本文从...

你高高兴兴设计好sgRNA，转染、筛选、测序，结果脱靶位点比预期多了三倍，或者在错误的位置出现切割——这时候谁都会头大。脱靶排查不是玄学，它有一套可复现的逻辑。本文从最蠢的低级错误讲起，按实验流程分模...

做克隆最怕什么？不是PCR扩不出条带，而是条带明明很亮，回收后浓度也达标，可一到平末端连接就“全军覆没”。转化板子上稀稀拉拉几个菌落，或者干脆没有——你反复检查体系、延长连接时间、加大T4连接酶用量，...

高密度发酵做毕赤酵母，最让人头疼的不是得不到蛋白，而是甲醇残留那个数像过山车——一会飙到 1.5 g/L 抑制菌体，一会又掉到 0.1 g/L 诱导不足。你以为是补料策略问题，调了一上午泵速，结果发现...

细胞冻存复苏这事，看着简单——冻上、化开、接着养，可一旦复苏后活细胞稀稀拉拉、贴壁率惨不忍睹，甚至整瓶飘着死细胞碎片，实验进度直接卡壳。新手最容易归咎于“细胞状态差”，但真相往往是冻存液配错、降温速率...

做毕赤酵母甲醇诱导表达，最怕的不是不表达，而是“三天过去了，目标蛋白还是那点可怜的量，甲醇加了又加，OD600也不涨”。这种慢调控 / 诱导效率低的问题，几乎每个做过的人都会遇到。但很多时候，不是表达...