来源：DNA Lab Space 实验教程 | 编译：DNA Lab Space
做GC-MS代谢组学最怕的不是检不出，而是衍生化反应“半生不熟”——峰面积忽高忽低、内标漂移、衍生化产物峰莫名其妙消失。很多人上来就怀疑试剂过期或仪器故障，其实根源常常埋在前端提取、水分控制、反应温度这类细节里。这篇教程按实验流程从低级错误到进阶疑难帮你逐项排查，覆盖溶剂提取、甲氧胺化、硅烷化、上机前保存等核心环节，并给出可直接套用的参数和验证方法。无论做血清、组织还是微生物样本，这套逻辑都适用。
第一步：快速排查低级错误
新手最容易栽在下面4个“基础坑”里，先花5分钟对一遍：
1. 样品没有完全保持低温
现象：代谢物峰大面积偏低，尤其在氨基酸和有机酸区段。
解决：样本在液氮速冻后于-80℃保存，研磨时每30秒补一次液氮，千万不能拿到室温回温。
2. 提取溶剂配错或忘记加内标
现象：同批次进样内标峰面积漂移超过30%。
解决：严格按氯仿:甲醇:水=2:5:2（v/v）现配现用，内标（如肉豆蔻酸-d27）在提取前统一加入，终浓度控制在50 μg/mL。
3. 氮吹吹得过干
现象：丙酮酸、草酰乙酸等低沸点代谢物完全消失。
解决：氮吹至“近干”即可，保留约50 μL液体，吹氮压力0.2 MPa，水浴温度≤40℃。
4. 衍生化试剂已经吸水失效
现象：空白基线全是硅氧烷峰，m/z 207背景极高。
解决：BSTFA+1%TMCS试剂用后立即充氮密封，并放在含变色硅胶的干燥器中；开盖超过3个月不建议使用。