来源：无细胞表达体系活性低镁离子浓度优化（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
做无细胞表达最气人的事情是什么?模板、NTP、裂解液都是新开封的，温度也稳在37°C，结果报告蛋白的荧光信号比阴性对照高不了多少。你查能量系统，查DNA质量，查了半天，唯独没想过那个最不起眼的变量——镁离子浓度。别看就是这么几毫摩尔的事，转录、翻译、mRNA降解全攥在它手里。本文直接给你一套排查路径，从低级错误到进阶工况，按流程拆开讲，每一步都能照着做。
第一步：先排除四个低级错误
1. 模板里残留EDTA。 DNA纯化最后一步用试剂盒洗脱时，EDTA可能跟着出来。1 mmol/L的EDTA足以螯合掉大部分游离镁，你的体系等于在“缺镁”状态下硬跑。解决:用无核酸酶水重新沉淀一遍DNA，或者把