来源：DNA Lab Space 实验教程 | 编译：DNA Lab Space
忙了两个月，换了三个启动子，流式分选后Sanger测序峰图还是平的——编辑效率低到怀疑人生。别急着换最新的脱氨酶突变体，大概率是融合构建或基础流程在拖后腿。本文只谈实操，从构建到细胞，把脱氨酶融合相关的坑逐层扒开。
第一步先扫雷，第二步分模块细查，第三步处理疑难杂症。每一步都给你完整的判断→验证→解决链条，照着做就行。
第一步：快速排查低级错误
先别动表达载体，这4个新手坑直接让效率归零：
1. 转染对照做了吗？ 拿GFP质粒试，用阳离子脂质体（Lipo3000按1:1.5比例）转染后24小时看荧光。阳性率低于70%就别做碱基编辑，先练转染。
2. 嘌呤霉素加早了？ 用到pX330系列或慢病毒载体时，通常1μg/mL筛选浓度，转染后48小时再加。加早了，细胞没来得及表达编辑器和sgRNA就死了，后面全是空信号。
3. sgRNA插反了？ BbsI酶切后反向连接是高频事故。酶切后跑1%琼脂糖凝胶，线性化条带应该在预期大小附近，再切一次对比条带位置。
4. 编辑位点不在窗口内？ 胞嘧啶编辑器（CBE）通常在PAM上游4-7位，腺嘌呤编辑器（ABE）在3-7位。你的目标C或A不在这个窗口里，效率天然就是0。先回数据库查清楚。
排查到这里还没解决？大概率是系统性问题，往下走。
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